32. Za přílohu č. 14 se doplňují přílohy č. 15, 16 a 17, které znějí:
„Příloha č. 15 k vyhlášce č.222/1996 Sb.
Obecné podmínky pro použití zkušební metody
1. Pracovní postup
Pracovní postup obsahuje dostatečně přesné a podrobné instrukce k provádění zkušební metody:
1.1 princip postupu, chemické reakce a případné interakce stanovovaného znaku, popis matrice a rozmezí stanovovaného znaku
1.2 použité chemikálie včetně chemické čistoty, příprava roztoků s uvedením koncentrace a stability
1.3 podrobný postup zkoušky, údaje o kalibraci, měření, výpočet
2. Shodnost metody
Shodnost metody označuje těsnost shody mezi nezávislými výsledky zkoušek získanými za předem specifikovaných podmínek. Míra shodnosti se počítá jako směrodatná odchylka výsledků zkoušek s_x.
Odhad hodnoty s_x se počítá pomocí rozpětí R, které je definováno jako rozdíl mezi nejmenší a největší hodnotou paralelního stanovení.
Provádí-li se dvě paralelní stanovení na m vzorcích, je směrodatná odchylka vyjádřena
$s_x=\sqrt{\frac{\sum _{j=1}^m{R_j}^2}{2m}}$
kde R_j = | x _j1 - x _j2 | je rozpětí, tj. rozdíl dvo u paralelních stanovení, provedených na j-tém vzorku. Z vypočtené směrodatné odchylky s_x se vypočte ukazatel opakovatelnosti (r) analytické metody v dané analytické laboratoři. Pro opakovatelnost /r/ platí (při dvou paralelních opakování a hladinu významnosti P (0,95)): r = 2,8.s_x. Směrodatná odchylka s_x resp. opakovatelnost se určuje z dostatečně velkého počtu vzorků téhož druhu materiálu (p ≥ 20). Směrodatná odchylka s_x se neurčuje z jedné ověřovací série, ale z dlouhodobého měření v dané laboratoři na vzorcích téhož druhu materiálu.
3. Správnost metody
Správnost metody určuje těsnost shody mezi průměrnou hodnotou získanou z velké řady výsledků zkoušek a přijatou referenční hodnotou. Referenční hodnota se odvodí jako
a) teoretická nebo stanovená hodnota založená na vědeckých podkladech
b) přiřazená nebo certifikovaná hodnota založená na experimentálních pracích národních nebo mezinárodních organizací
c) odsouhlasená nebo certifikovaná hodnota založená na spolupráci pod patronací vědeckých nebo technických skupin
d) jestliže není k dispozici očekávaná hodnota veličiny uvedená v bodech a) až c), uvede se střední hodnota specifikovaného souboru měření (medián, průměr).
4. Linearita metody
Linearitou metody se označuje přímková závislost mezi odezvou detekce a koncentrací analytu. Linearita se ověřuje metodami matematické statistiky. V případě zkušebních metod nevykazujících lineární závislost mezi odezvou detekce a koncentrací analytu, postupuje se metodami matematické statistiky, které nejsou založeny na předpokladu většinou normálního rozdělení a nepoužívají odhadu žádných parametrů.
5. Citlivost metody
Citlivost metody určuje nejmenší rozdíl koncentrace stanovovaného znaku, jež odpovídá nejmenšímu zjistitelnému rozdílu, jenž může být zjištěn vhodnou odezvou signálu metody.
6. Mez stanovitelnosti metody
Mezí stanovitelnosti metody se rozumí nejnižší koncentrace stanovovaného znaku, kdy je dosažena statisticky přijatelná správnost a přesnost. Většinou se jako mez stanovitelnosti bere první bod kalibrační křivky.
7. Selektivita metody
Selektivita metody udává přehled o použitelnosti zkušební metody vzhledem ke koncentraci rušivých prvků. Zpravidla se udává, jaká koncentrace určitého znaku v matrici vzorku nemá statisticky významný vliv na správnost výsledků.
Úplné znění validačního programu bude obsaženo ve Věstníku ministerstva zemědělství České republiky.
8. Výpočet opakovatelnosti a reprodukovatelnosti
Opakovatelnost vyjadřuje shodnost za podmínek opakovatelnosti a reprodukovatelnost shodnost za podmínek reprodukovatelnosti. Pro mez opakovatelnosti (r) a reprodukovatelnosti (R) platí
r = 2,8 x s_r resp. r = 2,8.s_x (viz čl. 2 přílohy 15); R = 2,8 x s_R, kde odhad rozptylu reprodukovatelnosti s_R² je dán součtem odhadu rozptylu opakovatelnosti s_r² a mezilaboratorního rozptylu s_L² a platí:
s_R² = s_r² + s_L²
Hodnoty s_r² a s_L² se určí podle následujících rovnic:
${s_r}^2=\frac{\sum _{i=1}^p{n}_i-1\times {s_i}^2}{\sum _{i=1}^p{n}_i-p}$
${s_L}^2=\frac{1}{p-1}\sum _{i=1}^p{n}_i{{\stackrel{-}{y}}_i-\stackrel{̿}{y}}^2-{s_r}^2$
kde
${s_i}^2=\frac{1}{n_i-1}\sum _{i=1}^{n_i}{\stackrel{-}{y}-y_i}^2$
$\stackrel{̿}{y}=\frac{\sum _{i=1}^p{n}_i{\stackrel{-}{y}}_i}{\sum _{i=1}^p{n}_i}$
$\stackrel{̿}{n}=\frac{1}{p-1}\sum _{i=1}^p{n}_i-\frac{{\sum }_{i=1}^p{n_i}^2}{\sum _{i=1}^p{n}_i}$
kde n_i je počet výsledků a y_i je jeden takovýto výsledek, p je počet laboratoří, které poskytly alespoň jeden výsledek.
Ve speciálním případě, kdy pro všechna n_i platí n_i=n=2, se použije rozpětí w_i=2s_i, čímž se získají vztahy:
${s_r}^2=\frac{1}{2p}\sum _{i=1}^p{w_i}^2$
a
${s_L}^2=\frac{1}{p-1}\sum _{i=1}^p{n}_i{{\stackrel{-}{y}}_i-\stackrel{̿}{y}}^2-\frac{{s_r}^2}{2},$
k vyhlášce č. 222/1996 Sb.
Způsob posouzení pracovní přesnosti míchacího zařízení
1. Zkoušení pracovní přesnosti se uskutečňuje u všech míchacích zařízení, která slouží pro finální výrobu premixů a krmiv s použitím premixů.
2. Ke zkoušení se používá výhradně jako indikační doplňková látka dimetridazol nebo lasalocid, u které je před zkouškou ověřen obsah účinné látky a látka je upravena tak, aby veškeré částice propadaly drátěným sítem o velikosti strany oka 0,5 mm. Pro zkoušku pracovní přesnosti 1 : 10 000 se odvažuje 100 g jako 100 % látky na 1 tunu míchaného substrátu, k ověření pracovní přesnosti 1 : 100 000 se odvažuje 10 g jako 100 % látky. Před použitím látky je přípustné její předmíchání do 1 kg použitého nosiče.
3. Ke zkoušce se používá jako nosič pro míchací zařízení sloužící k výrobě premixů s minerálním nosičem nebo pro výrobu doplňkových minerálních krmiv, krmný vápenec jemně nebo velmi jemně mletý. V ostatních případech se používá ke zkoušce jako nosič pšeničná mouka krmná. Velikost částic míchaného substrátu má být menší jak než 1 mm.
4. Míchací zařízení, u kterého se uskutečňuje zkouška nesmí propouštět míchaný substrát, míchací element musí být úplný, nepoškozený, zbavený zbytků a zcela vyprázdněný. Pokud se jedná o typové míchací zařízení, porovná se technické provedení míchacího zařízení s technickými podmínkami jeho výrobce a o porovnání se vyhotovuje protokol o shodě.
5. Protokol o shodě obsahuje tyto náležitosti:
a) o jaké zařízení se jedná a kdo je jeho výrobcem,
b) typ míchacího zařízení,
c) výrobní číslo (pokud je uvedeno),
d) rok výroby,
e) provozovatel (pokud se nejedná o zkoušky u výrobce zařízení),
f) posouzení shody výrobku s technickými podmínkami:
- technické parametry (pohon, pracovní část - míchací element, vyprazdňovací zařízení)
- funkční parametry (opotřebení mechanických částí, změny tvaru dílů, těsnost stroje po naplnění),
- souhrnné vyjádření a případná doporučení,
- kdo provedl posouzení shody (popis, případně razítko),
- za provozovatele (výrobce) podpis, případně razítko,
- datum vyhotovení protokolu.
6. Vlastní postup zkoušky
Míchací zařízení se naplní míchaným nosičem (pšeničnou moukou krmnou, krmným vápencem), který se odváží s přesností ± 1 % z celkové jeho navážky. Odvažuje se takové množství, aby zaplnilo nejméně dvě třetiny objemu míchacího prostoru, který je udán výrobcem. Po kontrole těsnosti míchacího zařízení, která se uskutečňuje za jeho chodu, se za klidu míchacího elementu vpraví na povrch nosiče odvážené množství (s přesností 0,01 g) indikační doplňkové látky a míchací zařízení se uvede do chodu na dobu stanovenou výrobcem v technických podmínkách (pokud není stanovena na dobu udanou provozovatelem). Po ukončení stanovené doby se přikročí k odběru vzorků.
7. Odběr vzorků se uskutečňuje podle technického provedení míchacího zařízení buď za jeho klidu přímo z míchacího prostoru nebo při jeho vyprazdňování za chodu míchacího zařízení. Odběr dílčích vzorků se uskutečňuje pomocí dvouplášťového vertikálního vzorkovače nebo pomocí vzorkovací krabice pro odběr vzorků z celého průřezu toku materiálu. Pokud nelze použít k odběru vzorků při vyprazdňování žádnou z uvedených vzorkovacích pomůcek, lze výjimečně použít vhodnou vzorkovací lopatku. Za dílčí vzorek se považuje jeden vpich vzorkovače nebo jeden náběr vzorkovací krabicí. Takto odebrané dílčí vzorky se neupravují a přímo vkládají do obalů.
8. Úprava a zkoušení vzorků
Úpravu vzorků pro zkoušení stanovuje příloha č. 7, bod 1.7. Pro zkoušení se používají výhradně postupy uvedené v příloze č. 10, a to pro lasalocid pod bodem 2.23 a pro dimetridazol pod bodem 3.1.
Pro doplňkové látky dimetridazol a lasalocid, které jsou ustanoveny k ověření přesnosti míchacích zařízení, platí následující hodnoty opakovatelnosti:

Doplňková látka	Obsah mg/kg	Opakovatelnost
Lasalocid	od 0,5 do 15	10% relat.
	od 50 do 150	5% relat.
Dimetridazol	od 5 do 15	10% relat.
	od 50 do 180	5 mg.

Z každého upraveného dílčího vzorku vždy po samostatné úpravě mícháním se oddělí dva zkušební vzorky pro 2 paralelní stanovení indikační doplňkové látky a u jednoho náhodně vybraného dílčího vzorku se oddělí čtyři zkušební vzorky pro 4 paralelní stanovení. Provedené paralelní stanovení u každého dílčího vzorku se nesmí od sebe odchylovat o více než je stanovená opakovatelnost pro danou metodu zkoušení. Z dvou paralelních stanovení u každého dílčího vzorku se vypočítá pro každý vzorek průměrná hodnota obsahu doplňkové látky, která slouží pro stanovení celkového rozptylu.
9. Stanovení celkového rozptylu
Pro zpracování celkového rozptylu se použije jednotlivá paralelní stanovení u dílčích vzorků, z kterých se vypočte průměrná hodnota pro každý dílčí vzorek. Do výpočtu se dosadí průměrné hodnoty (x) dílčích vzorků.
Pro stanovení celkového rozptylu (s²) platí:
$s^2=\frac{1}{k-1}\sum _{j=1}^k{{\stackrel{-}{x}}_j-\stackrel{-}{x}}^2$
kde: k je celkový počet odebraných dílčích vzorků (počet úrovní)
${\stackrel{-}{x}}_j$ je průměr uvnitř úrovně
$\stackrel{-}{x}$ je průměr ze všech analytických stanovení (celkový průměr)
10. Stanovení rozptylu zkušební metody
Pro stanovení rozptylu zkušební metody platí:
${s_y}^2=\frac{1}{n-1}\sum _{i=1}^n{x_i-{\stackrel{-}{x}}_i}^2$
kde: n je počet paralelních opakování pro ověření metody (ověřovací sérii)
x_i je i-té stanovení na vzorku, který je použit k ověření metody (ověřovací sérii),
${\stackrel{-}{x}}_i$ je průměr stanovení u vzorku, který je použit k ověření metody (ověřovací sérii),
11. Pracovní přesnost míchacího zařízení se považuje za vyhovující, pokud zkoušený substrát vykazuje homogenitu použité doplňkové látky a pro uvedené platí vztah: kdy
$F_{\mathrm{0,05}}=\frac{s^2}{{s_y}^2}{F}_{\mathrm{0,1}}\alpha ,k-1;n-1$
12. Ze zkoušení pracovní přesnosti míchacího zařízení se vystavuje protokol o zkouškách, který obsahuje:
a) typ míchacího zařízení, o které se jedná a pro jakou pracovní přesnost bylo zkoušeno (§ 7 odst. 3 písmeno b) zákona č. 91/1996 Sb.),
b) kdo je výrobcem míchacího zařízení,
c) jaká indikační doplňková látka byla použita a v jakém obsahu na kg zkoušeného substrátu (teorie),
d) vlastní výsledky jednotlivých zkoušek obsahující číslo vzorku, pod kterým byl zařazen do zkoušek, pořadové číslo paralelního stanovení, prokázaný obsah doplňkové látky v paralelním stanovení, průměrný obsah doplňkové látky v dílčím vzorku, celkový průměr ze všech paralelních stanovení použitých k výpočtu celkového rozptylu, celkový rozptyl, rozptyl metody, f-test vypočítaný, f-test tabelovaný pro úroveň 0,1,
e) závěrečné hodnocení,
f) datum vyhotovení protokolu,
g) razítko a podpis osoby provádějící zkoušky
Protokol o zkoušení pracovní přesnosti je přenosný na stejné typy míchacích zařízení za předpokladu, že míchací zařízení bylo posouzeno a vystaven protokol o shodě mezi typem míchacího zařízení, které již vyhovělo požadavkům pro pracovní přesnost a míchacím zařízením, které je posuzováno, zda je shodné.
13. Vzor protokolu o zkouškách.

k vyhlášce č.222 /1996 Sb.
Hodnoty reprodukovatelnosti pro metody zkoušení
Pokud není u metod zkoušení v přílohách č. 9 a 10 určeno jinak, používají se hodnoty reprodukovatelnosti uvedené v následující tabulce.

Jakostní znak	Deklarovaný obsah	Analytické rozpětí
Vlhkost (voda)	do 15 %	± 0,3 % abs.
	nad 15 %	± 2 % relat.
Dusíkaté látky	do 160 g/kg	± 4 g/kg
	160 - 320 g/kg	± 2,5 % relat.
	nad 320 g/kg	± 8 g/kg
Tuk	4 - 100 g/kg	± 4 g/kg
	100 - 200	± 4 % relat.
	nad 200 g/kg	± 8 g/kg
Vláknina	4 - 100	± 4 g/kg
	nad 100 g/kg	± 4 % relat.
Popel	2 - 40 g/kg	± 10 % relat.
	40 - 100 g/kg	± 4 g/kg
	100 - 150 g/kg	± 4 % relat.
	150 - 200 g/kg	± 6 g/kg
	nad 200 g/kg	± 3 % relat.
Škrob	do 120 g/kg	± 6 g/kg
	120 - 200	± 5 % relat.
	nad 200 g/kg	± 10 g/kg
Cukr	5 - 250 g/kg	± 5 g/kg
	250 - 500	± 2 % relat.
	nad 500 g/kg	± 10 g/kg
Fosfor	1.2 - 10 g/kg	± 0,6 g/kg
	nad 10 g/kg	± 6 % relat.
Vápník	1 - 5 g/kg	± 0,5 g/kg
	5 - 60 g/kg	± 10 % relat.
	60 - 100 g/kg	± 6 g/kg
	nad 100 g/kg	± 6 % relat.
Hořčík, draslík	2 - 50 g/kg	± 10 % relat.
	nad 50 g/kg	± 5 g/kg
Sodík	0,4 - 1,6 g/kg	± 0,2 g/kg
	1,6 - 80 g/kg	± 12,5 % relat.
	nad 80 g/kg	± 10 g/kg
Nerozpustný podíl popele v HCl	3 - 100 g/kg	± 3 g/kg
	nad 100 g/kg	± 3 % relat.
Chloridy jako NaCl	do 10 g/kg	± 1 g/kg
	10 - 50 g/kg	± 10 % relat.
	nad 50 g/kg	± 5 g/kg
Močovina (krmivo)	2 - 20 g/kg	± 2 g/kg
	20 - 100 g/kg	± 10 % relat.
Močovina (surovina)	100 - 200 g/kg	± 10 g/kg
	nad 200 g/kg	± 5 % relat.
Uhličitany jako CaCO3	2 - 25 g/kg	± 2 g/kg
	25 - 100 g/kg	± 8 % relat.
	nad 100 g/kg	± 8 g/kg
Stravitelnost dusíkatých látek	bez rozdílu obsahu	± 2 % relat.
Aminokyseliny	bez rozdílu obsahu	± 10 % relat.
Mastné kyseliny volné	nad 50 g/kg	± 10 % relat.
Kyselost tuku	nad 4 mg KOH/g tuku	± 15 % relat.
Karotenoidy	bez rozdílu obsahu	± 15 % relat.
Měď, kobalt, železo, zinek, mangan	do 5 mg/kg	± 50 % relat.
	5 - 10 mg/kg	± 2,5 mg/kg
	10 - 30 mg/kg	+ 25 % relat.
	30 - 50 mg/kg	± 7,5 mg/kg
	nad 50 mg/kg	± 15 % relat.
Jod	bez rozdílu obsahu	± 25 % relat.
Vitamin A	2 000 - 4 000 m.j./kg	1 000 m.j./kg
	4 000 - 100 000 m.j./kg	25 % relat.
	100 000 - 125 000 m.j./kg	25 000 m.j./kg
	125 000 - 375 000 m.j./kg	20 % relat.
	375 000 - 600 000 m.j. /kg	75 000 m.j./kg
	600 000 - 800 000 m.j. /kg	12,5 % relat.
	800 000 - 100 0000	100 000 m.j./kg
	nad 1 000 000 m.j./kg	10 % relat.
Vitamin E	do 25 mg/kg	± 40 % relat.
	25 - 50 mg/kg	± 10 mg/kg
	50 - 150 mg/kg	± 20 % relat.
	150 - 200 mg/kg	± 30 mg/kg
	200 - 500 mg/kg	± 15 % relat.
	500 - 750 mg/kg	± 75 mg/kg
	nad 750 mg/kg	± 10 % relat.
Avilamycin, avoparcin, flavofosfolipol, monensinát sodný, salinomycinát sodný, tylosinfosfát, virginiamycin, zinkbacitracin a další antibiotika	0,5 - 25 mg/kg	± 40 % relat.
	25 - 50 mg/kg	± 10 mg/kg
	50 - 100 mg/kg	± 20 % relat.
	100 - 200 mg/kg	± 20 mg/kg
	nad 200 mg/kg	± 10 % relat.
Olachindox	2 - 12 mg/kg	± 50 % relat.
	12 - 40 mg/kg	± 6 mg/kg
	40 - 300 mg/kg	± 15 % relat.
	300 - 450 mg/kg	± 45 mg/kg
	450 - 5 000 mg/kg	± 10 % relat.
	5 000 - 10 000 mg/kg	± 500 mg/kg
	nad 10 000 mg/kg	± 5 % relat.
Amprolium	20 - 100 mg/kg	± 10 mg/kg
	100 - 5 000 mg/kg	± 10 % relat.
	5 000 - 10 000 mg/kg	± 500 mg/kg
	nad 10 000 mg/kg	± 5 % relat.
Meticlorpindol	40 - 100 mg/kg	± 15 mg/kg
	100 - 300 mg/kg	± 15 % relat.
	300 - 450 mg/kg	± 45 mg/kg
	450 - 5 000 mg/kg	± 10 % relat.
Robenidin, dimetridazol	4 - 10 mg/kg	± 2 mg/kg
	10 - 25 mg/kg	± 20 % relat.
	25 - 50 mg/kg	± 5 mg/kg
	50 - 5 000 mg/kg	± 10 % relat.
	5 000 - 10 000 mg/kg	± 500 mg/kg
	nad 10 000 mg/kg	± 5 % relat.
Methylbenzochát	5 - 10 mg/kg	± 50 % relat.
	10 - 20 mg/kg	± 5 mg/kg
	20 - 40 mg/kg	± 25 % relat.
	40 - 100 mg/kg	± 10 mg/kg
	100 - 5 000 mg/kg	± 10 % relat.
	5 000 - 10 000 mg/kg	± 500 mg/kg
	nad 10 000 mg/kg	± 5 % relat.
Aflatoxin B1	1 - 4 µg/kg	± 50 % relat.
	4 - 10 µg/kg	± 2 µg/kg
	nad 10 µg/kg	± 20 % relat.
Arsen	do 1 mg/kg	± 50 % relat.
	1 - 2,5 mg/kg	± 0,5 mg/kg
	2,5 - 15 mg/kg	± 20 % relat.
	15 - 30 mg/kg	± 3 mg/kg
	nad 30 mg/kg	± 10 % relat.
Olovo	1 - 3 mg/kg	± 50 % relat.
	3 - 5 mg/kg	± 1,5 mg/kg
	5 - 10 mg/kg	± 30 % relat.
	10 - 20 mg/kg	± 3 mg/kg
	20 - 40 mg/kg	± 15 % relat.
	40 - 60 mg/kg	± 6 mg/kg
	nad 60 mg/kg	± 10 % relat.
Kadmium	0,10 - 0,20 mg/kg	± 50 % relat.
	0,20 - 0,40 mg/kg	± 0,10 mg/kg
	0,40 - 1,0 mg/kg	± 25 % relat.
	1,0 - 2,5 mg/kg	+ 0,25 mg/kg
	nad 2,5 mg/kg	± 10 % relat.
Chlorované uhlovodíky	5 - 100 µg/kg	± 50 % relat.
	100 - 200 µg/kg	± 50 µg/kg
	nad 200 µg/kg	± 25 % relat.
Fluor	do 12 mg/kg	± 50 % relat.
	12 - 15 mg/kg	± 6 mg/kg
	15 - 30 mg/kg	± 40 % relat.
	30 - 60 mg/kg	± 12 mg/kg
	60 - 500 mg/kg	± 20 % relat.
	500 - 1 000 mg/kg	± 100 mg/kg
	nad 1 000 mg/kg	± 10 % relat.
Gossypol	nad 500 mg/kg	± 20 % relat.
Rtuť	0,04 - 0,06 mg/kg	± 50 % relat.
	0,06 - 0,10 mg/kg	± 0,03 mg/kg
	0,10 - 0,20 mg/kg	± 30 % relat.
	0,20 - 0,30 mg/kg	± 0,06 mg/kg
	nad 0,30 mg/kg	± 20 % relat.
Hořčičná silice	bez rozdílu obsahu	± 20 % relat.
Druhová čistota	bez rozdílu obsahu	bez tolerance
Škodlivé nečistoty	bez rozdílu obsahu	bez tolerance
Vinylthiooxazolidon	bez rozdílu obsahu	± 20 % relat.
Metabolizovaná energie	bez rozdílu obsahu	± 0,3 MJ/kg“