k vyhlášce č. 124/2001 Sb.
Metody laboratorního zkoušení krmiv, doplňkových látek a premixů
Seznam chemických metod laboratorního zkoušení doplňkových látek, premixů a krmných směsí s doplňkovými látkami a premixy
| 1. | Stimulátory růstu |
| 1.1. | Stanovení obsahu avilamycinu |
| 1.2. | Stanovení obsahu olachindoxu, metoda převzatá ze směrnice Komise 98/64/ES |
| 1.3. | Stanovení obsahu monensinu |
| 1.4. | Stanovení obsahu salinomycinu |
| 1.5. | Stanovení obsahu tylosinu, metoda převzatá ze směrnice Komise 72/199/EHS |
| 1.6. | Stanovení obsahu zinkbacitracinu, metoda převzatá ze směrnice Komise 84/4/EHS |
| 1.7. | Stanovení obsahu flavofosfolipolu, metoda převzatá ze směrnice Komise 78/633/EHS |
| 1.8. | Stanovení obsahu avoparcinu, metoda převzatá ze směrnice Komise 81/715/EHS |
| 1.9. | Stanovení obsahu monensinu, metoda převzatá ze směrnice Komise 81/715/EHS |
| 1.10. | Stanovení obsahu spiramycinu, metoda převzatá ze směrnice Komise 84/425/EHS |
| 1.11. | Stanovení obsahu virginiamycinu, metoda převzatá ze směrnice Komise 84/4/EHS |
| 2. | Antikokcidika |
| 2.1. | Stanovení obsahu amprolia, metoda převzatá ze směrnice Komise 99/27/ES |
| 2.2. | Stanovení obsahu maduramicinu |
| 2.3. | Stanovení obsahu methylbenzochátu, metoda převzatá ze směrnice Komise 93/117/ES |
| 2.4. | Stanovení obsahu narasinu |
| 2.5. | Stanovení obsahu nikarbazinu |
| 2.6. | Stanovení obsahu robenidinu, metoda převzatá ze směrnice Komise 93/117/ES |
| 2.7. | Stanovení obsahu meticlorpindolu |
| 2.8. | Stanovení obsahu salinomycinu - je uvedeno v Příloze 10, část 1 |
| 2.9. | Stanovení obsahu monensinu - je uvedeno v Příloze 10, část 1 |
| 2.10. | Stanovení obsahu halofuginonu, metoda převzatá ze směrnice Komise 93/70/EHS |
| 2.11. | Stanovení obsahu ethopabátu |
| 2.12. | Stanovení obsahu semduramicinu |
| 2.13. | Stanovení obsahu diclazurilu, metoda převzatá ze směrnice Komise 99/27/ES |
| 2.14. | Stanovení obsahu carbadoxu, metoda převzatá ze směrnice Komise 99/27/ES |
| 2.15. | Stanovení obsahu olachindoxu je uvedeno v Příloze 10, část 1 |
| 2.16. | Stanovení obsahu lasalocidu, metoda převzatá ze směrnice Komise 99/76/ES |
| 3. | Chemoterapeutika |
| 3.1. | Stanovení obsahu dimetridazolu |
| 4. | Vitaminy |
| 4.1. | Stanovení obsahu cholinu |
| 4.2. | Stanovení obsahu pantothenanu vápenatého |
| 4.3. | Stanovení obsahu vitaminu B1, B2, B6 |
| 4.4. | Stanovení obsahu vitaminu B2 |
| 4.5. | Stanovení obsahu vitaminu B6 |
| 4.6. | Stanovení obsahu vitaminu A, metoda převzatá ze směrnice Komise 2000/45/ES |
| 4.7. | Stanovení obsahu vitaminu E, metoda převzatá ze směrnice Komise 2000/45/ES |
| 4.8. | Stanovení obsahu vitaminu D |
| 5. | Mikroprvky |
| 5.1. | Stanovení obsahu mědi, železa, manganu a zinku - je uvedeno v příloze 9, část 8 |
| 5.2. | Stanovení obsahu kobaltu |
| 5.3. | Stanovení obsahu selenu |
| 6. | Výpočty |
| 6.1. | Vyhodnocování a výpočet výsledků stanovení obsahu doplňkových látek pro difúzní plotnové postupy |
| 7. | Barviva |
| 7.1. | Stanovení obsahu β-karotenu spektrofotometrickou metodou |
| 8. | Mikrobiotika |
| 8.1. | Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Streptococcus |
| 8.2. | Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Bacillus |
1. Stimulátory růstu
2. Antikokcidika
3. Chemoterapeutika
4. Vitaminy
Nestanovena.
1.1. Stanovení obsahu avilamycinu
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu avilamycinu v krmivech a premixech.
Obsah avilamycinu se stanoví po extrakci ze zkušebního vzorku chloroformem a přečištění extraktu na pevné fázi Silica, vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi C18 s gradientovou elucí a UV detekcí při λ = 295 nm.).
Opakovatelnost
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu olachindoxu 10 až 20 mg/kg 15 % relat. z hodnoty vyššího výsledku.
Účel, rozsah a princip
Opakovatelnost
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu olachindoxu v krmivech. Obsah olachindoxu se stanoví po extrakci směsí methanol - voda vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV-detekcí.
Mez stanovitelnosti je 5 mg/kg.
1.2. Stanovení obsahu olachindoxu
Je uvedena u metody.
Reprodukovatelnost
Mez stanovitelnosti je 0,2 mg/kg.
Obsah monensinu se stanoví po extrakci směsným rozpouštědlem, extrakt je přečištěn na pevné fázi a takto přečištěný extrakt je rozpuštěn v definovaném objemu mobilní fáze. Monensin se stanovuje vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi a po postkolonové derivatizaci s p-dimethylaminobenzaldehydem při 90 °C je detekován UV-detektorem při vlnové délce 600 nm.
| do 25 mg/kg | 40 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 10 mg/kg |
| od 50 do 100 mg/kg | 20 % relat. |
| od 100 do 200 mg/kg | 20 mg/kg |
| nad 200 mg/kg | 10 % relat. |
1.3. Stanovení obsahu monensinu
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu monensinu v krmivech a premixech.
Opakovatelnost
Účel, rozsah a princip
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu monensinu:
Mez stanovitelnosti
Reprodukovatelnost
| do 25 mg/kg | 20 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| od 50 do 100 mg/kg | 10 % relat. |
| od 100 do 200 mg/kg | 10 mg/kg |
| nad 200 mg/kg | 5 % relat. |
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu monensinu:
1.5. Stanovení obsahu tylosinu
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení tylosinu v krmivech, koncentrátech a premixech od obsahu 2 mg/kg.
Vzorek se podrobí působení fosfátového pufru pH 8 zahřátého na 80 °C, potom se extrahuje methanolem. Po odstředění se extrakt naředí a jeho antibiotická aktivita se stanoví změřením difúze tylosinu na agaru s Kocuria rhizophila (CCM 552). V přítomnosti mikroorganizmu se difúze projevuje tvorbou inhibičních zón. Průměr těchto zón je přímo úměrný logaritmu koncentrace antibiotika.
Mez stanovitelnosti je 2 mg/kg.
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 10 % relat.
Mez stanovitelnosti
Opakovatelnost
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Účel, rozsah a princip
1.4. Stanovení obsahu salinomycinu
Mez stanovitelnosti je 1,4 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
| do 25 mg/kg | 40 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 10 mg/kg |
| od 50 do 100 mg/kg | 20 % relat. |
| od 100 do 200 mg/kg | 20 mg/kg |
| nad 200 mg/kg | 10 % relat. |
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu salinomycinu:
Reprodukovatelnost
| do 25 mg/kg | 20 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| od 50 do 100 mg/kg | 10 % relat. |
| od 100 do 200 mg/kg | 10 mg/kg |
| nad 200 mg/kg | 5 % relat |
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu salinomycinu:
Opakovatelnost
Obsah salinomycinu se stanoví po extrakci směsným rozpouštědlem, extrakt je přečištěn na pevné fázi a takto přečištěný extrakt je rozpuštěn v definovaném objemu mobilní fáze. Salinomycin se stanovuje vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi a po postkolonové derivatizaci s p-dimethylaminobenzaldehydem při 90 °C je detekován UV-detektorem při vlnové délce 600 nm.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu salinomycinu v krmivech a premixech.
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení flavofosfolipolu v krmivech, koncentrátech a premixech.
| od 1 do 2 mg/kg | 0,5 mg/kg |
| od 2 do 10 mg/kg | 25 % relat. z vyššího výsledku |
| od 10 do 25 mg/kg | 20 % relat. z vyššího výsledku |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 50 mg/kg | 10 % relat. z vyššího výsledku |
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí při obsahu flavofosfolipolu překročit
Vzorek se extrahuje zředěným methanolem za varu pod zpětným chladičem. Po odstředění se extrakt přečistí (pokud je to třeba) na ionexu a naředí. Antibiotická aktivita vzorku se stanoví měřením difúze flavofosfolipolu do agarové půdy, zaočkované mikroorganismem Staphylococcus aureus (CCM 2022). Difúze se projeví tvorbou inhibičních zón. Průměr těchto zón se považuje za přímo úměrný logaritmu koncentrace antibiotika v rozsahu použitých koncentrací.
1.7. Stanovení obsahu flavofosfolipolu
Mez stanovitelnosti je 1 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
Opakovatelnost
Účel, rozsah a princip
Reprodukovatelnost
Vzorek se extrahuje při pH 2 směsí methanol-voda-kyselina chlorovodíková a roztokem síranu sodného. Přidání síranu sodného slouží k vysrážení rozpustných solí mědi, které mohou při stanovení rušit. Extrakt se upraví na pH 6,5, zakoncentruje se (je-li to nezbytné) a naředí. Jeho antibiotická aktivita se stanovuje měřením difúze zinkbacitracinu v agaru, do něhož byl naočkován mikroorganismus Micrococcus luteus (CCM 732). Difúze se projevuje vytvořením inhibičních zón. Průměr těchto zón se považuje za přímo úměrný logaritmu koncentrace antibiotika v rozsahu použitých koncentrací.
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení zinkbacitracinu v krmivech a premixech.
Opakovatelnost
Mez stanovitelnosti je 5 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
| od 5 do 10 mg/kg | 2 mg/kg |
| od 10 mg/kg do 25 mg/kg | 20 % relat. z vyššího výsledku |
| od 25 mg/kg do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 50 mg/kg | 10 % relat. z vyššího výsledku |
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu zinkbacitracinu:
1.6. Stanovení obsahu zinkbacitracinu
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu monensinu v krmivech a premixech.
Mez stanovitelnosti je 10 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena
Reprodukovatelnost
| do 25 mg/kg | 20 % relat. z vyššího výsledku |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 50 mg/kg | 10 % relat. z vyššího výsledku |
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu monensinu:
Opakovatelnost
Vzorek se extrahuje 90 % methanolem. Extrakt se podrobí vhodnému postupu podle obsahu monensinátu sodného ve vzorku. Jeho antibiotická aktivita se stanoví měřením difúze monensinátu sodného v agarové živné půdě zaočkované mikroorganismem Bacillus subtilis (CCM 1999). Difúze se projeví vznikem inhibičních zón testovacího organismu. Průměr těchto inhibičních zón je v rozsahu použitých koncentrací považován za přímo úměrný logaritmu koncentrace antibiotika. Citlivost Metodau je snížena přítomností sodných iontů.
Účel, rozsah a princip
1.9. Stanovení obsahu monensinu
Vzorek se extrahuje směsným roztokem methanol-fosfátouhličitanovým tlumivým roztokem pH 8,0. Extrakt se dekantuje nebo odstředí a naředí. Antibiotická aktivita se stanoví měřením difúze spiramycinu v agarové půdě zaočkované mikroorganismem Bacillus subtilis (CCM 1999). Difúze se projeví tvorbou inhibičních zón mikroorganismu. Průměr zón se považuje za přímo úměrný logaritmu koncentrace antibiotika v rozsahu použitých koncentrací.
| do 10 mg/kg | 2 mg/kg |
| od 10 do 25 mg/kg | 20 % relat. z vyššího výsledku |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 50 mg/kg | 10 % relat. z vyššího výsledku |
1.10. Stanovení obsahu spiramycinu
Účel, rozsah a princip
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu spiramycinu:
Opakovatelnost
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu spiramycinu v krmivech a premixech.
Mez stanovitelnosti je 1 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
1.11. Stanovení obsahu virginiamycinu
Mez stanovitelnosti
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu virginiamycinu:
Účel, rozsah a princip
| do 10 mg/kg | 2 mg/kg |
| od 10 do 25 mg/kg | 20 % relat. z vyššího výsledku |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 50 mg/kg | 10 % relat. z vyššího výsledku |
Reprodukovatelnost
Opakovatelnost
Mez stanovitelnosti 2 mg/kg.
Vzorek je extrahován methanolickým roztokem Tween 80. Extrakt se dekantuje nebo odstředí a potom vhodně naředí. Jeho antibiotická aktivita se stanovuje měřením difúze virginiamycinu v agaru, do něhož byl naočkován mikroorganismus Kocuria rhizophila (CCM 552). Difúze se projevuje vytvořením inhibičních zón. Průměr těchto zón se považuje za přímo úměrný logaritmu koncentrace antibiotika v rozsahu použitých koncentrací.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu virginiamycinu v krmivech a premixech.
Nestanovena.
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu avoparcinu:
1.8. Stanovení obsahu avoparcinu
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení avoparcinu v krmivech a premixech.
Mez stanovitelnosti je 2 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
| do 10 mg/kg | 2 mg/kg |
| od 10 do 25 mg/kg | 20 % relat. z vyššího výsledku |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 50 mg/kg | 10 % relat. z vyššího výsledku |
Přítomnost polyetherických antibiotik může na stanovení působit rušivě.
Vzorek se extrahuje směsí aceton-voda-kyselina chlorovodíková. Antibiotická aktivita extraktu se stanoví měřením difúze avoparcinu v živném agaru zaočkovaném mikroorganismem Bacillus subtilis (CCM 1999). Difúze se dokáže vznikem inhibičních zón mikroorganismu. Průměr těchto zón se považuje za přímo úměrný logaritmu koncentrace antibiotika v rozsahu použitých koncentrací.
Opakovatelnost
Mez stanovitelnosti je 25 mg/kg.
Reprodukovatelnost
Mez stanovitelnosti
| od 25 do 500 mg/kg | 15 % relat. z vyššího výsledku |
| od 500 do 1000 mg/kg | 75 mg/kg |
| nad 1 000 mg/kg | 7,5 % relat. z vyššího výsledku |
Je uvedena u metody.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu amprolia:
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu amprolia v krmivech a premixech. Mez detekce je 1 mg/kg.
2.1. Stanovení obsahu amprolia
Vzorek se extrahuje směsí methanol - voda. Po zředění extraktu mobilní fází a membránové filtraci se obsah amprolia stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií s výměnou kationtů a s UV detekcí.
Účel, rozsah a princip
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu maduramicinu:
| do 5 mg/kg | 10 % relat. |
| od 800 do 1200 mg/kg | 5 % relat. |
2.2. Stanovení obsahu maduramicinu
Opakovatelnost
Obsah maduramicinu se stanoví po extrakci vzorku extrakční směsí, následném přečištění na pevné fázi a postkolonové derivatizaci vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s použitím UV detekce při vlnové délce 598 nm
Reprodukovatelnost
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu maduramicinu v premixech.
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu maduramicinu:
| do 10 mg/kg | 30 % relat. |
| od 10 do 30 mg/kg | 3 mg/kg. |
| nad 30 mg/kg | 10 % relat. |
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 0,9 mg/kg.
Obsah methylbenzochátu se stanoví po extrakci vzorku methanolovým roztokem methansulfonové kyseliny, po přečištění extrakcí dichlormethanem je izolován na chromatografickém ionexovém sloupci a znovu extrahován dichlormethanem, nakonec stanoven vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí.
Mez stanovitelnosti je 1 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
Je uvedena u metody.
Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu methylbenzochátu od 4,0 do 20 mg/kg hodnotu 10 % relat. z vyššího výsledku.
Opakovatelnost
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu methylbenzochátu v krmivech a premixech.
2.3. Stanovení obsahu methylbenzochátu
Opakovatelnost
Nestanovena.
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
2.5. Stanovení obsahu nikarbazinu
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení nikarbazinu v krmivech a premixech.
Účel, rozsah a princip
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Nikarbazin se stanoví po extrakci ze vzorku extrakčním roztokem acetonitril – voda naředěním mobilní fází vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-HPLC) s isokratickou elucí na koloně C18 s UV detekcí při vlnové délce 351 nm.
2.4. Stanovení obsahu narasinu
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu narasinu:
Opakovatelnost
Mez stanovitelnosti je 1,4 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
| do 25 mg/kg | 40 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 10 mg/kg |
| od 50 do 100 mg/kg | 20 % relat. |
| od 100 do 200 mg/kg | 20 mg/kg |
| nad 200 mg/kg | 10 % relat. |
Obsah narasinu se stanoví po extrakci směsným rozpouštědlem, extrakt je přečištěn na pevné fázi a takto přečištěný extrakt je rozpuštěn v definovaném objemu mobilní fáze. Narasin se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi a po postkolonové derivatizaci s p-dimethylaminobenzaldehydem při 90 °C je detekován UV-detektorem při vlnové délce 600 nm.
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu narasinu
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu narasinu v krmivech a premixech.
Účel, rozsah a princip
Reprodukovatelnost
| do 25 mg/kg | 20 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| od 50 do 100 mg/kg | 10 % relat. |
| od 100 do 200 mg/kg | 10 mg/kg |
| nad 200 mg/kg | 5 % relat. |
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu meticlorpindolu.
Mez stanovitelnosti je 3,6 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
| od 50 do 200 mg/kg | 15 % relat. |
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu meticlorpindolu:
Reprodukovatelnost
| do 100 mg/kg | 5 % relat. |
| od 100 do 200 mg/kg | 5 mg/kg |
Opakovatelnost
Obsah meticlorpindolu se stanoví po extrakci vzorku směsným rozpouštědlem methanolamoniak a po jeho převedení do mobilní fáze vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 265 nm.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu meticlorpindolu v krmivech a premixech.
Účel, rozsah a princip
2.7. Stanovení obsahu meticlorpindolu
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení robenidinu v krmivech.
Mez stanovitelnosti je 5 mg/kg.
Mez stanovitelnosti
Je uvedena u metody
Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí při obsahu robenidinu nad 15 mg/kg překročit 10 % relat. vyššího výsledku.
Opakovatelnost
Vzorek se extrahuje okyseleným methanolem. Extrakt se vysuší a jeho alikvotní část se přečistí na koloně s oxidem hlinitým. Robenidin se eluuje z kolony methanolem, koncentruje se a na vhodný objem se upraví pomocí mobilní fáze. Obsah robenidinu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi pomocí UV detektoru.
Účel, rozsah a princip
2.6. Stanovení obsahu robenidinu
Obsah ethopabátu se stanoví po extrakci vzorku methanolem a přečištění chromatografií na pevné fázi vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s fluorescenční detekcí.
Mez stanovitelnosti
| do 1 mg/kg | nestanovena |
| od 1 do 20 mg/kg | 20 % relat. |
| od 20 do 1000 mg/kg | nestanovena |
| nad 1 000 mg/kg | 15 % relat. |
Účel, rozsah a princip
Mez stanovitelnosti je 0,03 mg/kg.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu ethopabátu:
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu ethopabátu:
Reprodukovatelnost
2.11. Stanovení obsahu ethopabátu
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu ethopabátu v krmivech a premixech.
| do 1 mg/kg | 40 % relat. |
| od 1 do 4 mg/kg | 0,4 mg/kg |
| od 4 do 20 mg/kg | 10 % relat. |
| od 20 do 1000 mg/kg | nestanovena |
| nad 1 000 mg/kg | 5 % relat. |
Metoda stanovení obsahu monensinu je uveden v příloze č. 10, část 1.
2.9. Stanovení obsahu monensinu
2.8. Stanovení obsahu salinomycinu
Metoda stanovení obsahu salinomycinu je uveden v příloze č. 10, část 1.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu halofuginonu v krmivech a premixech.
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu halofuginonu do 3 mg/kg hodnotu 0,5 mg/kg.
Mez stanovitelnosti je 1 mg/kg.
Reprodukovatelnost
Opakovatelnost
Je uvedena u metody.
Obsah halofuginonu se stanoví jako volná base po extrakci horkou vodou do ethylacetátu a následně se rozdělí jako hydrochlorid do vodného kyselého roztoku. Extrakt se přečistí na ionexové chromatografické koloně. Obsah halofuginonu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV-detekcí.
2.10. Stanovení obsahu halofuginonu
Mez stanovitelnosti
Účel, rozsah a princip
Obsah semduramicinu se stanoví po extrakci vzorku extrakční směsí, následném přečištění na pevné fázi a postkolonové derivatizaci vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s použitím UV detekce při vlnové délce 598 nm.
2.12. Stanovení obsahu semduramicinu
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech a premixech.
Opakovatelnost
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
2.13. Stanovení obsahu diclazurilu
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu diclazurilu:
Účel, rozsah a princip
| do 2,5 mg/kg | 30 % relat. z vyššího výsledku |
| od 2,5 do 5 mg/kg | 0,75 mg/kg |
| nad 5 mg/kg | 15 % relat. z vyššího výsledku |
Reprodukovatelnost
Je uvedena u metody.
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 0,5 mg/kg.
Metoda určuje podmínky pro stanovení obsahu diclazurilu v krmivech a premixech. Mez detekce je 0,1 mg/kg.
Vzorek se po přidání interního standardu extrahuje okyseleným methanolem. U krmiv se alikvotní část extraktu přečistí na SPE patroně C18. Diclazuril se z patronky eluuje směsí okyseleného methanolu a vody. Po odpaření se zbytek rozpustí ve směsi dimethylformamidu a vody. U premixů se extrakt odpaří a zbytek se rozpustí ve směsi dimethylformamidu a vody. Obsah diclazurilu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s ternárním gradientem a UV-detekcí.
Opakovatelnost
Lasalocid sodný se extrahuje ze vzorku okyseleným methanolem a stanoví se vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s fluorescenční detekcí.
Metoda určuje podmínky pro stanovení obsahu sodné soli lasalocidu v krmivech, premixech a doplňkových látkách. Mez detekce je 5 mg/kg.
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu lasalocidu:
Mez stanovitelnosti je 30 mg/kg.
| do 100 mg/kg | 15 % relat. z vyššího výsledku |
| od 100 do 200 mg/kg | 15 mg/kg |
| nad 200 mg/kg | 7,5 % relat. z vyššího výsledku |
Opakovatelnost
Reprodukovatelnost
Je uvedena u metody.
Mez stanovitelnosti
Účel, rozsah a princip
2.16. Stanovení obsahu lasalocidu
Metoda stanovení obsahu olachindoxu je uveden v příloze 10, část 1.
2.15. Stanovení obsahu olachindoxu
Reprodukovatelnost
Mez stanovitelnosti je 10 mg/kg.
2.14 Stanovení obsahu carbadoxu
Účel, rozsah a princip
Mez stanovitelnosti
Metoda určuje podmínky pro stanovení obsahu carbadoxu v krmivech, premixech a doplňkových látkách. Mez detekce je 1 mg/kg.
Vzorek se zvlhčí vodou a extrahuje směsí methanol - acetonitril. Alikvotní podíl extraktu krmiva se po filtraci přečistí na koloně s oxidem hlinitým. Extrakt z premixů a doplňkových látek se přímo ředí na vhodnou koncentraci směsí voda - methanol - acetonitril. Obsah carbadoxu se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi s UV detekcí.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu carbadoxu 10 mg/kg a vyšším 15 % relat. z hodnoty vyššího výsledku.
Je uvedena u metody.
| od 3 do 25 mg/kg | 20 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 50 mg/kg | 10 % relat. |
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:
Reprodukovatelnost
Obsah dimetridazolu se stanoví po extrakci vzorku 90 % methanolem. Následně se přečistí na pevné fázi a stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 309 nm.
Mez stanovitelnosti je 3 mg/kg.
3.1. Stanovení obsahu dimetridazolu
Mez stanovitelnosti
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:
Opakovatelnost
Účel, rozsah a princip
| od 3 do 30 mg/kg | 15 % relat. |
| od 30 do 100 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 100 mg/kg | 5 % relat. |
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu dimetridazolu v krmivech a premixech.
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit 10 % relat.
Obsah cholinu se stanoví po hydrolýze vzorku hydroxidem barnatým a přečištění hydrolyzátu na ionexu na základě vzniku komplexu s reineckátem amonným v prostředí roztoku fosforečnanu sodného spektrofotometricky po rozpuštění komplexu v acetonu při vlnové délce 525 nm. Alternativně je možno provádět stanovení cholinu metodou ITP.
Reprodukovatelnost
Opakovatelnost
4.1. Stanovení obsahu cholinu
Mez stanovitelnosti je 20 mg/kg.
Nestanovena.
Účel, rozsah a princip
Mez stanovitelnosti
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu cholinu v krmivech a premixech.
Opakovatelnost
Účel, rozsah a princip
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Obsah pantothenanu vápenatého se stanoví na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu Saccharomyces carlsbergensis CCM 4288 (ATCC 9080) difúzním plotnovým Metodaem.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu pantothenanu vápenatého v premixech.
Nestanovena.
4.2. Stanovení obsahu pantothenanu vápenatého
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminů B1, B2, B6 v krmných směsích.
4.3. Stanovení vitaminů B1, B2, B6
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Opakovatelnost
Nestanovena.
Vitaminy B1 (thiamin), B2 (riboflavin) a B6 (pyridoxin) se extrahují ze vzorku krmiva vodou a po hydrolýze kyselinou chloristou se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) s využitím iontových párů na reverzní fázi. Detekce vitaminu B2, a B6 se provádí přímo fluorescenční detekcí, zatímco vitamin B1 se před detekcí nejprve oxiduje derivatizačním činidlem v reakční smyčce postkolonové derivatizace.
Nestanovena.
Účel, rozsah a princip
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti
4.4. Stanovení obsahu vitaminu B2
Účel, rozsah a princip
Používají se dvě metody stanovení obsahu vitaminu B2 v premixech - metoda fluorometrická a metoda difúzně plotnová.
Obsah vitaminu B2 se stanoví fluorometricky v mírně okyseleném prostředí na základě fluorescence při vlnové délce 440 nm nebo difúzně plotnovou metodou na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu Lactobacillus rhamnosus CCM 1825 (ATCC 7469).
Opakovatelnost
Pro metodu fluorometrickou nestanovena.
Pro metodu difuzní plotnovou:
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí při obsahu vitaminu B2 500 000 mg/kg překročit hodnotu 40 500 mg/kg.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Nestanovena.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu B6 v premixech.
Nestanovena.
Opakovatelnost
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
Účel, rozsah a princip
4.5. Stanovení obsahu vitaminu B6
Vitamin B6 ve všech jeho formách se stanoví na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu kvasinky Saccharomyces carlsbergensis CCM 4228 (ATCC 9080) difúzním plotnovým způsobem.
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A v krmivech a premixech. Vitamin A zahrnuje all-trans retinol a jeho cis izomery, které se touto metodou stanoví. Obsah vitaminu A se vyjadřuje v mezinárodních jednotkách (IU) na kg. Mezinárodní jednotka odpovídá aktivitě 0,3 μg all-trans vitaminu A (alkohol) nebo 0,344 μg all-trans vitamin A (acetát) nebo 0,550 μg all-trans vitaminu A (palmitát).
Účel, rozsah a princip
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 15 % relat. z hodnoty vyššího výsledku.
4.6. Stanovení obsahu vitaminu A
Mez stanovitelnosti
Reprodukovatelnost
Opakovatelnost
Je uvedena u metody.
Vzorek se hydrolyzuje ethanolickým roztokem hydroxidu draselného a vitamin A se extrahuje petroletherem. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v methanolu a pokud je to nutné, naředí se na vhodnou koncentraci. Obsah vitaminu A se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-HPLC) s UV nebo fluorescenční detekcí. Chromatografické parametry jsou vybrány tak, aby nedocházelo k separaci all-trans vitaminu A (alkohol) a jeho cis izomerů.
Mez stanovitelnosti je 2000 m.j./kg
Mez stanovitelnosti je 2 mg/kg.
Opakovatelnost
Účel, rozsah a princip
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 15 % relat. z vyššího výsledku.
4.7. Stanovení obsahu vitaminu E
Reprodukovatelnost
Je uvedena u metody.
Mez stanovitelnosti
Vzorek se hydrolyzuje ethanolickým roztokem hydroxidu draselného a vitamin E se extrahuje petroletherem. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v methanolu a pokud je to nutné, naředí se na vhodnou koncentraci. Obsah vitaminu E se stanoví vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi (RP-HPLC) s UV nebo fluorescenční detekcí.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu E v krmivech a premixech. Obsah vitaminu E se vyjadřuje jako mg DL-α-tokoferol acetátu na kg. 1 mg DL-α-tokoferol acetátu odpovídá 0,91 mg DL-α-tokoferolu (vitamin E).
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit 30 % relat.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu D v krmivech.
4.8. Stanovení obsahu vitaminu D
Vitamin D se stanoví po alkalické hydrolýze vzorku hydroxidem draselným za studena, následné extrakci do hexanu, přečištění na semipreparativní koloně Silica metodou HPLC. Frakce vitaminu D se zachytí, odpaří se k suchu a odparek se rozpustí v methanolu. V extraktu se stanoví obsah vitaminu D vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na analytické koloně s reverzní fází C18 s UV detekcí při 265 nm.
Účel, rozsah a princip
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 20 % relat.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
5. Mikroprvky
5.1. Stanovení obsahu mědi, železa, manganu a zinku
Metoda stanovení obsahu mědi, železa, manganu a zinku je uveden v příloze č. 9, část 8.
Mez stanovitelnosti
Účel, rozsah a princip
5.2. Stanovení obsahu kobaltu
Nestanovena.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu kobaltu v krmivech.
Nestanovena.
Obsah kobaltu se stanoví po mineralizaci vzorku v chloridovém výluhu metodou atomové absorpční spektrometrie (AAS).
Nestanovena.
Opakovatelnost
Reprodukovatelnost
Účel, rozsah a princip
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Opakovatelnost
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení selenu v krmivech.
Nestanovena.
5.3. Stanovení obsahu selenu.
Ve vzorku se po rozkladu kyselinou dusičnou v uzavřeném systému stanoví obsah selenu metodou atomové absorpční spektrometrie (AAS).
6. Výpočty
Účel, rozsah a princip
6.1. Vyhodnocování a výpočet výsledků stanovení obsahu doplňkových látek pro difúzně plotnové metody
Metoda uvádí a specifikuje uzančně závazný způsob pro vyhodnocování a výpočet výsledků při stanovení obsahu doplňkových látek v krmivech a premixech pro difúzně plotnové metody.
Průměry inhibičních resp. stimulačních zón, vzniklých při stanovení doplňkových látek difusně plotnovou metodou, se měří s přesností nejméně na 0,1 mm. Ze souboru takto získaných hodnot se vypočítá aritmetický průměr pro každou koncentraci zkoušeného vzorku i standardu.
7. Barviva
Mez stanovitelnosti
7.1. Stanovení β-karotenu spektrofotometrickou metodou
Účel, rozsah a princip
β-karoten je přírodní barvivo chemicky patřící do skupiny tetraterpenoidů a je provitaminem vitaminu A.
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu β-karotenu v krmivech.
Stanoví se po enzymatické hydrolýze směsí enzymů pepsin - trypsin (1:1) v alkalickém prostředí, rozpuštěním v acetonu a následnou extrakcí do hexanu, spektrofotometricky při vlnové délce 451 nm.
Opakovatelnost
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Nestanovena.
8. Mikrobiotika
Účel, rozsah a princip
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení počtu zárodků rodu Streptococcus skupiny D (Enterococcus) v krmivech a premixech.
8.1. Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Enterococcus
Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Enterococcus se provádí na selektivních půdách podle Slanetze a Bartleye. Jako referenční půda se při stanovení používá další selektivní půda (např. KF agar) nebo u premixů vhodná neselektivní půda. Naočkované půdy jsou kultivovány při 37 °C ± 1 °C. Růst a počty kolonií se vyhodnocují po dvou a čtyřdenní kultivaci.
Opakovatelnost
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Bacillus se provádí anaerobní kultivací na krevním agaru při 37 °C. Počty kolonií, charakteristické pro dané mikroorganismy, se vyhodnocují po 18 - 24 hodinách.
Opakovatelnost
Metoda specifikuje podmínky pro stanovení počtu zárodků rodu Bacillus v krmivech.
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Účel, rozsah a princip
8.2. Stanovení počtu zárodků bakterií rodu Bacillus