10.11. Stanovení obsahu aflatoxinu B₁
Účel, rozsah a princip
Pro stanovení aflatoxinu B1 jsou popsány Metoda A a Metoda B:
Metoda A
Metoda dává možnost stanovit obsah aflatoxinu B1 v surovinách a v jednosložkových krmivech. Metoda nemůže být použita za přítomnosti slupek citrusu. Mez stanovitelnosti je 0,01 mg/kg. Za přítomnosti interferujících látek je nutné opakovat analýzu Metodou B (vysokoúčinná kapalinová chromatografie).
Vzorek se extrahuje chloroformem. Extrakt se zfiltruje a alikvotní díl se přečistí na chromatografické koloně se silikagelem. Eluát se odpaří a zbytek se rozpustí v definovaném objemu chloroformu nebo ve směsi benzenu a acetonitrilu. Alikvotní podíl roztoku se analyzuje metodou tenkovrstvé chromatografie. Množství aflatoxinu B1 se určí po ozáření UV lampou, buď vizuálně, nebo fluorometricky porovnáním se známým množstvím aflatoxinu B1. Totožnost aflatoxinu B1 extrahovaného z krmiva musí být potvrzena určeným postupem
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu aflatoxinu B1

od 10 do 20 μg/kg	25 % relat. z nejvyššího výsledku
od 20 do 50 μg/kg	5 μg/kg
nad 50 μg/kg	10 % relat. z nejvyššího výsledku

Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu aflatoxinu

od 10 do 20 μg/kg	50 % relat.
od 20 do 50 μg/kg	10 μg/kg
nad 50 μg/kg	20 % relat.

Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 10 μg/kg.
Metoda B
Metoda se používá pro stanovení aflatoxinu B1 v živočišných krmivech včetně krmiv obsahujících citrusovou slupku. Mez stanovitelnosti je 0,001 mg/kg.
Vzorek se extrahuje chloroformem. Extrakt se zfiltruje a alikvotní podíl se přečistí na florisilové kolonce a potom na kolonce C₁₈. Konečná separace a stanovení se provede vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií na reverzní fázi C₁₈, následné postkolonové derivatizaci vodným roztokem jodu a fluorescenční detekci.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit 11 % relat.
Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu aflatoxinu B1:

do 10 μg/kg	50 % relat.
od 20 μg/kg do 50 μg/kg	10 μg/kg
nad 50 μg/kg	20 % relat.

Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 1 μg/kg.