152. V příloze části 6 Speciální část, kapitola 6.1 Léčivé a pomocné látky, články Pepsini pulvis a Pergolidi mesilas znějí:
„
Pepsini pulvis
Pepsin práškový
Synonymum. Pepsinum
CAS 9001-75-6
Je to přípravek ze žaludeční sliznice prasat, skotu nebo ovcí. Obsahuje žaludeční proteinasy, které jsou účinné v kyselém prostředí (pH 1 až 5). Počítáno na vysušenou látku, účinnost je nejméně 0,5 Ph.Eur.j. v miligramu.
Výroba
Kde je to vhodné, vyhovuje článku Producta cum possibili transmissione vectorium encephalopathiarum spongiformium animalium.
Zvířata, ze kterých se pepsin získává, musí splňovat požadavky oprávněné autority na zdraví zvířat určených pro konzumaci lidmi.
Musí se dokázat, v jakém rozsahu dovolí výrobní postup inaktivaci nebo odstranění jakékoliv kontaminace viry nebo jinými původci infekce.
Vlastnosti
Bílý nebo slabě žlutý krystalický nebo amorfní hygroskopický prášek. Je dobře rozpustný ve vodě, prakticky nerozpustný v lihu 96%. Vodný roztok může slabě opalizovat a mít slabě kyselou reakci.
Zkouška totožnosti
30 mg modře fibrinové R se rozmělní v třecí misce a suspenduje se ve 20 ml kyseliny chlorovodíkové zředěné RS2. Suspenze se filtruje přes filtrační papír, který se pak promývá kyselinou chlorovodíkovou zředěnou RS2 do získání bezbarvého filtrátu. Ve filtračním papíru se udělá otvor a modř fibrinová R se vymývá 20 ml kyseliny chlorovodíkové zředěné RS2 do kuželové baňky. Před použitím se protřepe. Množství zkoušené látky odpovídající nejméně 20 Ph.Eur.j., se rozpustí ve 2 ml kyseliny chlorovodíkové zředěné RS2 a pH se upraví na hodnotu 1,6 ±0,1. 1 ml tohoto roztoku se přenese do zkumavky obsahující 4 ml suspenze modře fibrinové R, promíchá se, umístí se za opatrného protřepávání do vodní lázně při 25 °C. Současně se stejným způsobem provede slepá zkouška za použití 1 ml vody R. Po 15min zahřívání je kontrolní roztok získaný při slepé zkoušce bezbarvý a roztok se zkoušenou látkou je modrý.
Zkoušky na čistotu
Ztráta sušením (2.2.32). Nejvýše 5,0 %; 0,500 g se suší 4 h nad oxidem fosforečným R při 60 °C a tlaku nepřevyšujícím 670 Pa.
Mikrobiální znečištění (2.6.12). Celkový počet živých aerobních mikroorganismů je nejvýše 104 v gramu, stanoví se počítáním na pevných půdách. Vyhovuje zkoušce na nepřítomnost Escherichia coli a Salmonella (2.6.13).
Stanovení účinnosti
Stanoví se porovnáním množství peptidů nevysrážených kyselinou trichloroctovou RS a stanovených za použití zkoumadla fosfomolybdenan-wolframového R, uvolněných za 1 min z roztoku substrátu hemoglobinu RS s množstvím peptidů uvolněných pepsinem práškovým BRP ze stejného substrátu a za stejných podmínek.
Během přípravy zkoušeného a porovnávacího roztoku je třeba se vyvarovat jejich třepání a zpěnění.
Zkoušený roztok. Těsně před použitím se připraví roztok zkoušené látky v kyselině chlorovodíkové zředěné RS2 s předpokládanou účinností 0,5 Ph.Eur.j. v mililitru, je-li třeba, upraví se pH kyselinou chlorovodíkovou 1 mol/l RS na hodnotu 1,6 ±0,1 a zředí se na příslušný objem.
Porovnávací roztok. Méně než 15 min před použitím se připraví roztok pepsinu práškového BRP obsahující 0,5 Ph.Eur.j. v 1 ml kyseliny chlorovodíkové zředěné RS2, je-li třeba, upraví se pH kyselinou chlorovodíkovou 1 mol/l RS na hodnotu 1,6 ±0,1 a zředí se na příslušný objem.
Zkumavky se označí duplicitně T, Tb, S1, S1b, S2, S2b, S3, S3b a jedna zkumavka se označí B.
Přidá se kyselina chlorovodíková RS2 následujícím způsobem:
1,0 ml do zkumavky označené B,
0,5 ml do zkumavek označených S1 a S1b,
0,25 ml do zkumavek označených S2, S2b, T a Tb.
Přidá se porovnávací roztok následujícím způsobem:
0,5 ml do zkumavek označených S1 a S1b,
0,75 ml do zkumavek označených S2 a S2b,
1,0 ml do zkumavek označených S3 a S3b.
Přidá se 0,75 ml zkoušeného roztoku do zkumavek označených T a Tb.
Do zkumavek S1b, S2b, S3b, Tb a B se přidá 10,0 ml kyseliny trichloroctové RS. Roztoky se třepáním promíchají.
Zkumavky a hemoglobin RS se umístí do vodní lázně při teplotě (25 ±0,1) °C. Je-li dosaženo rovnoměrné teploty, přidá se 5,0 ml hemoglobinu RS do zkumavek S1b, S2b, S3b, Tb a B a promíchá se.
V čase 0 se přidá 5,0 ml hemoglobinu RS v 30s intervalech postupně do zkumavek S1, S2, S3 a T, které se po každém přídavku promíchají.
Přesně 10 min po přidání hemoglobinu RS a v intervalech 30 s se reakce zastaví přidáním 10,0 ml kyseliny trichloroctové RS do zkumavek S1, S2, S3 a T (použije se pevná dělená pipeta nebo automatická pipeta s odvzdušněním) a promíchá se.
Obsah každé zkumavky (zkoušené roztoky, porovnávací roztoky i kontrolní roztok) se přefiltruje dvakrát přes vhodný filtrační papír, který byl předem promyt roztokem kyseliny trichloroctové R (50 g/l), pak vodou R a vysušen. Prvních 5 ml filtrátu se odstraní. 3,0 ml každého filtrátu se převede odděleně do zkumavek s 20 ml vody R a promíchá se.
Vhodný filtrační papír vyhovuje následující zkoušce: 5 ml roztoku kyseliny trichloroctové R (50 g/l) se zfiltruje přes bílý filtračního papír o průměru 7 cm. Absorbance (2.2.25) filtrátu měřená při 275 nm proti nefiltrovanému roztoku kyseliny trichloroctové R jako kontrolní tekutině je menší než 0,04.
Do každé zkumavky se přidá 1,0 ml hydroxidu sodného RS a 1,0 ml zkoumadla fosfomolybdenan-wolframového R počínaje kontrolním roztokem a pak zkoušenými a porovnávacími roztoky v každé sadě v uvedeném pořadí. Výše uvedené operace jsou znázorněny v tabulce 1.
Po 15 min se měří absorbance (2.2.25) roztoků S1, S2, S3, S1b, S2b, S3b a T při 540 nm proti filtrátu získaném ze zkumavky B jako kontrolní tekutiny. Odečtou se průměrné hodnoty absorbance pro filtráty ze zkumavek S1, S2 a S3 od průměrných hodnot absorbance pro filtráty ze zkumavek S1b, S2b, S3b.
Sestrojí se kalibrační křivka opravených hodnot proti objemu použitého porovnávacího roztoku. Účinnost zkoušené látky se stanoví z rozdílu absorbance pro zkoušený roztok (T-Tb) zjištěné z kalibrační křivky. K výpočtu se použijí zřeďovací faktory.
Tab. 1
| Zkumavky | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| S1 | S1b | s2 | S2b | S3 | S3b | T | Tb | B | |
| kyselina chlorovodíková zředěná RS2 (ml) | 0,5 | 0,5 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 1,0 | ||
| porovnávací roztok (ml) | 0,5 | 0,5 | 0,75 | 0,75 | 1,0 | 1,0 | |||
| zkoušený roztok (ml) | 0,75 | 0,75 | |||||||
| kyselina trichloroctová RS (ml) | 10,0 | 10,0 | 10,0 | 10,0 | 10,0 | ||||
| zamíchá se | + | + | + | + | + | ||||
| vodní lázeň při 25 °C | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
| hemoglobin RS (ml) | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | ||||
| zamíchá se | + | + | + | + | + | ||||
| hemoglobin RS (ml) | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | |||||
| zamíchá se | + | + | + | + | |||||
| vodní lázeň při 25 °C, 10 min | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
| kyselina trichloroctová RS (ml) | 10,0 | 10,0 | 10,0 | 10,0 | |||||
| zamíchá se | + | + | + | + | |||||
| zfiltruje se | + | + | + | + | + | + | + | + | + |
Uchovávání
Ve vzduchotěsných obalech, chráněn před světlem, při teplotě 2 °C až 8 °C.
Označování
V označení na obalu se uvede účinnost v Ph.Eur.j. v miligramu.
†† Pergolidi mesilas
Pergolidiummesilat
| C20H30N2O3S2 | Mr 410,60 | CAS 66104-23-2 |
Je to (6aR,9R, 10aR)-9-[(methylthio)methyl]-7-propyl-4,6,6a,7,8,9,10,10a-oktahydroindolo[4,3-fg]chinoliniumme-thansulfonat1). Počítáno na vysušenou látku, obsahuje 97,5 % až 102,0 % sloučeniny C20H30N2O3S2.
Vlastnosti
Bílý nebo téměř bílý krystalický prášek. Je těžce rozpustný ve vodě, mírně rozpustný v methanolu, těžce rozpustný v lihu 96% a v dichlormethanu a velmi těžce rozpustný v acetonu.
Zkoušky totožnosti
A. Specifická optická otáčivost (2.2.7). -17° až -23°; počítáno na vysušenou látku. Měří se roztok připravený rozpuštěním 0,25 g v dimethylformamidu R a zředěním stejným rozpouštědlem na 25,0 ml.
B. Infračervené absorpční spektrum (2.2.24) tablety zkoušené látky odpovídá spektru tablety pergolidiummesilatu CRL.
Zkoušky na čistotu
Příbuzné látky. Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29).
Zkoušený roztok. 30,0 mg se rozpustí v methanolu R a zředí se jím na 10,0 ml.
Porovnávací roztok (a). 1,0 ml zkoušeného roztoku se zředí methanolem R na 100,0 ml. 1,0 ml tohoto roztoku se zředí methanolem R na 10,0 ml.
Porovnávací roztok (b). 10 mg 4,4'-dimethoxybenzofenonu R se rozpustí v methanolu R a zředí se jím na 10 ml. K 1 ml tohoto roztoku se přidají 2 ml zkoušeného roztoku a zředí se methanolem R na 100 ml. 1 ml tohoto roztoku se zředí methanolem R na 10 ml.
Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:
- nerezové ocelové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4,6 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným deaktivovaným pro chromatografii bazických látek R (5 μm),
- mobilní fáze s průtokovou rychlostí 1 ml/min:
- mobilní fáze A - 5,0 ml morfolinu pro chromatografii R se smíchá s 995 ml vody R a pH se upraví kyselinou fosforečnou R na hodnotu 7,0. Použije se do 24 h,
- mobilní fáze B - směs stejných objemových dílů acetonitrilu R, methanolu R a tetrahydrofuranu R,
| Čas (min) | Mobilní fáze A % (V/V) | Mobilní fáze B % (V/V) | Poznámky |
|---|---|---|---|
| 0 - 35 | 70 → 0 | 30 → 100 | lineární gradient |
| 35 - 40 | 0 → 70 | 100 → 30 | návrat k počátečním podmínkám |
| 40 - 50 | 70 | 30 | ustalování |
- spektrofotometrického detektoru, 280 nm.
Teplota kolony se udržuje na 40 °C.
Nastaví se citlivost systému tak, aby výška hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) při nástřiku 20 μl byla nejméně 90 % celé stupnice zapisovače.
Nastříkne se 20 μl porovnávacího roztoku (b). Zkoušku lze hodnotit, jestliže rozlišení mezi píky odpovídajícími 4,4'-dimethoxybenzofenonu (první pík) a pergolidu (druhý pík) je nejméně 2,0.
Nastříkne se 20 μl zkoušeného roztoku a 20 μl porovnávacího roztoku (a).
Na chromatogramu zkoušeného roztoku není plocha žádného píku, kromě hlavního píku, větší než plocha hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (0,1 %); součet ploch všech píků, kromě hlavního píku, není větší než pětinásobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (0,5 %). Nepřihlíží se k pikům, jejichž plocha je menší než 0,2násobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (0,02 %).
Ztráta sušením (2.2.32). Nejvýše 0,5 %; 1,000 g se suší 1 h ve vakuu při 100 °C až 105 °C.
Síranový popel (2.4.14). Nejvýše 0,1 %; stanoví se s 1,00 g zkoušené látky.
Stanovení obsahu
Stanoví se kapalinovou chromatografií (2.2.29).
Roztok A. 5,0 mg DL-methioninu R se rozpustí v 500 ml kyseliny chlorovodíkové 0,01 mol/l VS, přidá se 500 ml methanolu R a promíchá se.
Zkoušený roztok. 65,0 mg zkoušené látky se rozpustí v roztoku A a zředí se jím na 100,0 ml. 10,0 ml tohoto roztoku se zředí roztokem A na 100,0 ml.
Porovnávací roztok. 65,0 mg pergolidiummesilatu CRL se rozpustí v roztoku A a zředí se jím na 100,0 ml. 10,0 ml tohoto roztoku se zředí roztokem A na 100,0 ml.
Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:
- nerezové ocelové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4,6 mm naplněné silikagelem oktylsilanizovaným deaktivovaným pro chromatografii bazických látek R (5 μm),
- mobilní fáze, kterou je směs objemových dílů acetonitrilu R, methanolu R a směsi připravené následujícím způsobem: 2,0 g oktansulfonanu sodného R se rozpustí ve vodě R, přidá se 1,0 ml kyseliny octové bezvodé R a zředí se vodou R na 1000 ml (1 + 1 + 2). Průtoková rychlost je 1 ml/min,
- spektrofotometrického detektoru, 280 nm.
Teplota kolony se udržuje na 40 °C.
Nastříkne se 20 μl porovnávacího roztoku. Při zaznamenání chromatogramu za předepsaných podmínek je retenční čas pergolidu asi 9 min. Citlivost systému se nastaví tak, aby výška hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku byla nejméně 50 % celé stupnice zapisovače.
Zkoušku lze hodnotit, jestliže faktor symetrie píku pergolidu je nejvýše 1,5.
Nastříkne se 20 μl zkoušeného roztoku.
Obsah C20H30N2O3S2 se vypočítá z ploch píků a z deklarovaného obsahu pergolidiummesilatu CRL.
Uchovávání
Chráněn před světlem.
Venenum.
Nečistoty
Kvalifikované nečistoty:
A. R = SO-CH3: (6aR,9R,10aR)-9-[(methylsulfinyl)methyl]-7-propyl-4,6,6a,7,8,9,10,10a-oktahydroindolo[4,3-fg]chinolin (pergolidsulfoxid).
Jiné detegovatelné nečistoty:
B. R = SO2-CH3: (6aR,9R,10aR)-9-[(metoylsulfonyl)methyl]-7-propyl-4,6,6a,7,8,9,10,10a-oktahydroindolo[4,3-fg]chinolin (pergolidsulfon).
“