219. V příloze části 6 Speciání část, kapitola 6.2 Léčivé přípravky, kapitola 6.2.2 Jednotlivé léčivé přípravky, se za článek Kalii iodidi oculoguttae doplňuje článek Liquiritiae extractum fluidum ethanolicum normatum, který zní:
„
Liquiritiae extractum fluidum ethanolicum normatum
Lékořicový extrakt tekutý lihový standardizovaný
Synonymum. Tekutý lékořicový lihový extrakt titrovaný
Vyrábí se z drogy Liquiritiae radix. Obsahuje 3,0 % až 5,0 % kyseliny glycyrrhizinové (C₄₂H₆₂O₁₆, M_r 823).
Výroba
Vyrábí se z drogy a lihu R 70% (V/V) vhodným postupem pro tekuté extrakty uvedeným v článku Extrakta.
Vlastnosti
Tmavě hnědá čirá tekutina, nevýrazného charakteristického pachu a sladké chuti.
Zkoušky totožnosti
Provede se tenkovrstvá chromatografie (2.2.27) za použití desky s vrstvou silikagelu TLC F₂₅₄ pro chromatografii R. Zkoušený roztok. 1,0 g se smíchá v 50ml baňce s kulatým dnem se 16,0 ml vody R a 4,0 ml kyseliny chlorovodíkové RS a zahřívá se 30 min na vodní lázni pod zpětným chladičem. Po ochlazení se zfiltruje. Filtr i baňka se suší 60 min při 105 °C. Filtr se vloží zpět do baňky, smíchá se s 20 ml etheru R a zahřívá se 5 min ve vodní lázni pod zpětným chladičem při 40 °C. Po ochlazení se zfiltruje. Filtrát se odpaří do sucha a zbytek se rozpustí v 5,0 ml etheru R. Porovnávací roztok. 5,0 mg kyseliny glycyrrhetinové R a 5,0 mg thymolu R se rozpustí v 5 ml etheru R.
Na vrstvu se nanese do pruhů po 10 μl obou roztoků. Vyvíjí se směsí objemových dílů amoniaku 26% R, vody R, lihu 96% R a ethylacetatu R (1 +9 + 25 + 65) po dráze 15 cm. Vrstva se suší 5 min na vzduchu a pozoruje se v ultrafialovém světle při 254 nm. Na chromatogramech zkoušeného roztoku a porovnávacího roztoku je v dolní polovině skvrna zhášející fluorescenci (kyselina glycyrrhetinová). Vrstva se postříká anisaldehydem RS, suší se 5 min až 10 min při 100 °C až 105 °C a pozoruje se v denním světle. Na chromatogramu porovnávacího roztoku je v dolní polovině fialová skvrna (kyselina glycyrrhetinová), v horní třetině červená skvrna (thymol). Na chromatogramu zkoušeného roztoku je v dolní polovině fialová skvrna odpovídající polohou a zbarvením skvrně kyseliny glycyrrhetinové na chromatogramu porovnávacího roztoku a v horní třetině v poloze odpovídající poloze pod skvrnou thymolu na chromatogramu porovnávacího roztoku je žlutá skvrna (isoliquiritigenin). Na chromatogramu zkoušeného roztoku jsou další skvrny.
Zkoušky na čistotu
Ethanol (2.9.10). 52 % (V/V) až 65 % (V/V).
Methanol a 2-propanol (2.9.11). Nejvýše 0,05 % (V/V) methanolu a nejvýše 0,05 % (V/V) 2-propanolu.
Stanovení obsahu
Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29).
Zkoušený roztok. 1,000 g se zředí směsí objemových dílů amoniaku zředěného RS1 a vody R (8 + 92) na 100 ml a odstředí se. 2,0 ml supernatantní tekutiny se zředí směsí objemových dílů amoniaku zředěného RS1 a vody R (8 + 92) na 100,0 ml.
Základní roztok. 0,130 g monoamoniumglycyrrhizinatu CRL se rozpustí ve směsi objemových dílů amoniaku zředěného RS1 a vody R (8 + 92) a zředí se stejnou směsí na 100,0 ml.
Porovnávací roztok (a). 5,0 ml základního roztoku se zředí směsí objemových dílů amoniaku zředěného RS1 a vody R (8 + 92) na 100,0 ml.
Porovnávací roztok (b). 10,0 ml základního roztoku se zředí směsí objemových dílů amoniaku zředěného RS1 a vody R (8 + 92) na 100,0 ml.
Porovnávací roztok (c). 15,0 ml základního roztoku se zředí směsí objemových dílů amoniaku zředěného RS1 a vody R (8 + 92) na 100,0 ml.
Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:
- nerezové ocelové kolony délky 0,10 m a vnitřního průměru 4 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným pro chromatografii R (5 μm),
- mobilní fáze, kterou je směs objemových dílů kyseliny octové RS, acetonitrilu R a vody R (6 + 30 + 64); průtoková rychlost je 1,5 ml/min,
- spektrofotometrického detektoru, 254 nm.
Nastříkne se 10 μl porovnávacího roztoku (c). Citlivost přístroje se nastaví tak, aby výšky píků činily nejméně 50 % celé stupnice zapisovače.
Nastříknou se odděleně porovnávací roztoky a stanoví se plochy píků.
Sestrojí se kalibrační křivka za použití koncentrací porovnávacích roztoků (g/100 ml) na ose x a odpovídajících ploch píků na ose y.
Nastříkne se 10 μl zkoušeného roztoku. Za použití retenčních časů a ploch píků na chromatogramech porovnávacích roztoků se identifikuje a stanoví plocha píku kyseliny glycyrrhizinové na chromatogram zkoušeného roztoku.
Obsah kyseliny glycyrrhizinové (C₄₂H₆₂O₁₆) v procentech se vypočítá podle vzorce:
$A.\frac{5}{m}.B.\frac{822}{840},$
v němž značí:
A - koncentraci monoamoniumglycyrrhizinatu ve 100 ml zkoušeného roztoku, odečtenou z kalibrační křivky v gramech,
B - deklarovaný obsah monoamoniumglycyrrhizinatu CRL v procentech,
m - hmotnost zkoušené látky v gramech,
822 - molekulovou hmotnost kyseliny glycyrrhizinové,
840 - molekulovou hmotnost monoamoniumglycyrrhizinatu (bezvodého).
Uchovávání
Chráněn před světlem.
“