27. V příloze části 6 Speciální část, kapitola 6.1 Léčivé a pomocné látky, se za článek Alprenololi hydrochloridum doplňuje článek Alprostadilum, který zní:
„
†† Alprostadilum
Alprostadil
Synonymum. Prostaglandin E1
| C20H34O5 | Mr 354,48 | CAS 745-65-3 |
Je to kyselina 7-{(1R,2R,3R)-3-hydroxy-2-[(1E,3S)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxocyklopentyl}heptanová. Počítáno na bezvodou látku, obsahuje 95,0 % až 102,5 % sloučeniny C20H34O5.
Vlastnosti
Vzhled. Bílý nebo slabě nažloutlý krystalický prášek.
Rozpustnost. Prakticky nerozpustný ve vodě, snadno rozpustný v lihu 96%, dobře rozpustný v acetonu a těžce rozpustný v ethylacetatu.
Zkoušky totožnosti
A. Specifická optická otáčivost (2.2.7). -60° až -70°, počítano na bezvodou látku; měří se roztok připravený v čas potřeby rozpuštěním 50 mg v lihu 96% R a zředěním stejným rozpouštědlem na 10,0 ml.
B. Infračervené absorpční spektrum (2.2.24).
Porovnání s alprostadilem CRL.
Příprava. Měří se látky ve formě tablet.
C. Hodnotí se chromatogramy získané ve zkoušce Stanovení obsahu.
Hodnocení. Retenční čas a velikost hlavního píku na chromatogramu zkoušeného roztoku odpovídá retenčnímu času a velikosti hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku.
Zkoušky na čistotu
Příbuzné látky. Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29).
Roztoky se připraví za ochrany před světlem.
Zkoušený roztok. 10,0 mg se rozpustí ve směsi stejných objemových dílů acetonitrilu R1 a vody R a zředí se stejnou směsí na 10,0 ml.
Porovnávací roztok (a). 100 μl zkoušeného roztoku se zředí směsí stejných objemových dílů acetonitrilu R1 a vody R na 20,0 ml.
Porovnávací roztok (b). 1,0 mg dinoprostonu nečistoty C CRL (alprostadilu nečistoty H) a 1,0 mg alprostadilu CRL se rozpustí ve směsi stejných objemových dílů acetonitrilu R1 a vody R a zředí se stejnou směsí na 20,0 ml.
Porovnávací roztok (c). Jsou-li rozkladné složky (nečistota A a nečistota B) připraveny in situ, 1 mg zkoušené látky se rozpustí ve 100 μl hydroxidu sodného 1 mol/l RS (roztok se zbarví hnědočerveně), po 3 min se přidá 100 μl kyseliny fosforečné 1 mol/l RS (žlutobílý opalizující roztok) a zředí se směsí stejných objemových dílů acetonitrilu R1 a vody R na 5,0 ml.
Systém A
Kolona:
- rozměry: délka (l) 0,25 m, vnitřní průměr (d) 4,0 mm;
- stacionární fáze: silikagel oktylsilanizovaný deaktivovaný pro chromatografii bazických látek R (4 μm), velikost pórů 6 nm;
- teplota: 35 °C.
Mobilní fáze:
- mobilní fáze A: 3,9 g dihydrogenfosforečnanu sodného R se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 1000,0 ml; pH se upraví roztokem kyseliny fosforečné R (2,9 g/l) na hodnotu 2,5 (asi 600 ml). K 740 ml tohoto tlumivého roztoku se přidá 260 ml acetonitrilu R1,
- mobilní fáze B: 3,9 g dihydrogenfosforečnanu sodného R se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 1000,0 ml; pH se upraví roztokem kyseliny fosforečné R (2,9 g/l) na hodnotu 2,5 (asi 600 ml). K 200 ml tohoto tlumivého roztoku se přidá 800 ml acetonitrilu R1.
| Čas (min) | Mobilní fáze A % (V/V) | Mobilní fáze B % (V/V) |
|---|---|---|
| 0 - 75 | 100 | 0 |
| 75 - 76 | 100 → 0 | 0 → 100 |
| 76 - 86 | 0 | 100 |
| 86 - 87 | 0 → 100 | 100 → 0 |
| 87 - 102 | 100 | 0 |
Průtoková rychlost. 1 ml/min.
Detekce. Spektrofotometr, 200 nm.
Nástřik. Nastřikuje se po 20 μl za použití injektorové smyčky.
Test způsobilosti systému:
- retenční čas: alprostadil asi 63 min,
- rozlišení: nejméně 1,5 mezi pikem alprostadilu nečistoty H a pikem alprostadilu na chromatogramu porovnávacího roztoku (b).
Systém B
Použijí se stejné podmínky jako v systému A s následující mobilní fází a elučním programem:
- mobilní fáze A: 3,9 g dihydrogenfosforečnanu sodného R se rozpustí ve vodě R a zředí se jí na 1000,0 ml; pH se upraví roztokem kyseliny fosforečné R (2,9 g/l) na hodnotu 2,5 (asi 600 ml). K 600 ml tohoto tlumivého roztoku se přidá 400 ml acetonitrilu R1,
- mobilní fáze B: použije se mobilní fáze B popsaná v systému A.
| Čas (min) | Mobilní fáze A % (V/V) | Mobilní fáze B % (V/V) |
|---|---|---|
| 0 - 50 | 100 | 0 |
| 50 - 51 | 100 → 0 | 0 → 100 |
| 51 - 61 | 0 | 100 |
| 61 - 62 | 0 → 100 | 100 → 0 |
| 62 - 72 | 100 | 0 |
Test způsobilosti systému:
- relativní retenční časy vztažené na alprostadil (retenční čas je asi 7 min):
- nečistota A: asi 2,4;
- nečistota B: asi 2,6;
- rozlišení: nejméně 1,5 mezi pikem nečistoty A a pikem nečistoty B na chromatogramu porovnávacího roztoku (c).
Zkouška se provede podle postupu v systému A a B.
Limity:
- korekční faktory: vynásobením ploch odpovídajících píků korekčními faktory (viz tabulka 1) se získají korigované plochy,
- nečistota A (korigovaná plocha): nejvýše trojnásobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (1,5 %),
- nečistota B (korigovaná plocha): nejvýše plocha hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (0,5 %),
- jakákoliv další nečistota (korigovaná plocha): nejvýše 1,8násobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (0,9 %). Nejvýše jeden takový pík má plochu větší než je plocha hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (0,5 %). Vyhodnotí se nečistoty, které se objeví v systému A při relativních retenčních časech menších než 1,2 a nečistoty, které se objeví v systému B při relativních retenčních časech větších než 1,2,
- celkový obsah všech nečistot (korigovaná plocha): nejvýše trojnásobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (1,5 %),
- zanedbatelnost píků: 0,1násobek plochy hlavního píku na chromatogramu porovnávacího roztoku (a) (0,05 %).
Tab. 1
| Nečistota | Relativní retenční čas (systém A) | Relativní retenční čas (systém B) | Korekční faktor |
|---|---|---|---|
| nečistota G | 0,80 | - | 0,7 |
| nečistota F | 0,88 | - | 0,8 |
| nečistota D | 0,90 | - | 1,0 |
| nečistota H | 0,96 | - | 0,7 |
| nečistota E | 1,10 | - | 0,7 |
| nečistota C | - | 1,36 | 1,9 |
| nečistota K | - | 1,85 | 0,06 |
| nečistota A | - | 2,32 | 0,7 |
| nečistota B | - | 2,45 | 1,5 |
| nečistota I | - | 4,00 | 1,0 |
| nečistota J | - | 5,89 | 1,0 |
Voda, mikrostanovení (2.5.32). Nejvýše 0,5 %; stanoví se s 50 mg zkoušené látky.
Stanovení obsahu
Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29) způsobem popsaným ve zkoušce Příbuzné látky, systém A, viz Zkoušky na čistotu.
Roztoky se připraví za ochrany před světlem.
Zkoušený roztok. 10,0 mg se rozpustí ve směsi stejných objemových dílů acetonitrilu R1 a vody R a zředí se stejnou směsí na 25,0 ml. 3,0 ml tohoto roztoku se zředí směsí stejných objemových dílů acetonitrilu R1 a vody R na 20,0 ml.
Porovnávací roztok. 10,0 mg alprostadilu CRL se rozpustí ve směsi stejných objemových dílů acetonitrilu R1 a vody R a zředí se stejnou směsí na 25,0 ml. 3,0 ml tohoto roztoku se zředí směsí stejných objemových dílů acetonitrilu R1 a vody R na 20,0 ml.
Nástřik. Nastřikuje se po 20 μl.
Vypočítá se obsah C20H34O5 v procentech.
Uchovávání
Při teplotě 2 °C až 8 °C.
Venenum.
Následující vzorové chromatogramy jsou uvedeny jen pro informaci, netvoří závaznou část článku.
Obr. 1 Vzorový chromatogram pro zkoušku Příbuzné látky (systém A).
Obr. 2 Vzorový chromatogram pro zkoušku Příbuzné látky (systém B).
Nečistoty
A. kyselina 7-{(1R,2S)-2-[(1E,3S)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxocyklopent-3-enyl}heptanová (prostaglandin A1),
B. kyselina 7-{2-[(1E,3S)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxocyklopent-1-enyl}heptanová (prostaglandin B1),
C. kyselina 7-{(1R,2R,3R)-3-hydroxy-2-[(1E)-3-oxookt-1-enyl]-5-oxocyklopentyl}heptanová (15-oxoprostaglandin E1),
D. kyselina 7-{(1R,2R,3R)-3-hydroxy-2-[(1E,3R)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxocyklopentyl}heptanová (15-epiprostaglandin E1),
E. kyselina 7-{(1R,2R,3S)-3-hydroxy-2-[(1E,3S)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxocyklopentyl}heptanová (11-epiprostag-landin E1),
F. kyselina 7-{(1S,2R,3R)-3-hydroxy-2-[(1E,3S)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxocyklopentyl}heptanová (8-epiprostaglandin E1),
G. kyselina (5Z)-7-{(1R,2R,3R)-3-hydroxy-2-[(1E,3S)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxocyklopentyl}hept-5-enová (dinoproston, prostaglandin E2),
H. kyselina (5E)-7-{(1R,2R,3R)-3-hydroxy-2-[(1E,3S)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxocyklopentyl}hept-5-enová ((5E)-prostaglandin E2),
I. R = CH2-CH3: ethyl-7-{(1R,2R,3R)-3-hydroxy-2-[(1E,3S)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxocyklopentyl}heptanoat1) (ethylester prostaglandinu E1),
J. R = CH2(CH3)2: isopropyl-7-{(1R,2R,3R)-3-hydroxy-2-[(1E,3S)-3-hydroxyokt-1-enyl]-5-oxo-cyklopentyl}heptanoat2) (isopropylester prostaglandinu E1),
K. trifenylfosfinoxid.
“