51. V příloze části 6 Speciální část, kapitola 6.1 Léčivé a pomocné látky, se za článek Centauri herba doplňuje článek Centellae asiaticae herba, který zní:
„
Centellae asiaticae herba
Pupečníková nať
Synonymum. Herba centellae asiaticae
Je to usušená řezaná nať druhu Centella asiatica (L.) URBAN. Celkový obsah derivátů triterpenu je nejméně 6,0 %, vyjádřeno jako asiatikosid (C₄₈H₇₈O₁₉; M_r 959,15), počítáno na sušinu.
Vlastnosti
Makroskopický a mikroskopický popis, viz Zkoušky totožnosti A a B.
Zkoušky totožnosti
A. Listy mají proměnlivou velikost; řapík je obvykle pětkrát až desetkrát, někdy patnáctkrát delší než čepel, která je 10 mm až 40 mm dlouhá a 20 mm až 40 mm, často až 70 mm široká. Listy jsou střídavé, často na uzlinách shloučené, jsou ledvinovité nebo okrouhlé, nebo oválně eliptické, s dlanitou žilnatinou, obvykle se sedmi žilkami, okraj čepele je vroubkovaný. Mladé listy naspodu ochmýřené, starší listy jsou olysalé. Květenství, je-li přítomno, tvoří jednoduchý okolík, většinou tříkvětý, řidčeji dvou nebo čtyřkvětý. Květy jsou velmi malé (asi 2 mm), pětičetné, semeník spodní; plod je hnědošedá okrouhlá nažka, až 5 mm dlouhá, ze stran silně zploštělá se sedmi až devíti vyniklými zakřivenými žebry.
B. Droga se upráškuje (355). Prášek je zelenošedý. Pozoruje se pod mikroskopem v chloralhydrátu RS. Práškovaná droga je charakteristická těmito znaky: četné úlomky pokožky listu s mnohohrannými buňkami a nepravidelně rýhovanou kutikulou, paracytické průduchy (2.8.3) jsou četnější na spodní straně listu; úlomky pokožky řapíku s protáhlými buňkami; dlouhé, jednobuněčné, jednořadé někdy mnohobuněčné zprohýbané krycí chlupy; mladé lístky; cévy šroubovitě ztlustlé; pryskyřičné kanálky; krystaly a drúzy šťavelanu vápenatého o průměru až 40 um; svazky úzkých komůrkových vláken stonku; úlomky plodu s vrstvami širokých, parketovitě uspořádaných buněk, cévami kruhovitě ztlustlými a buňkami parenchymu obsahujícími jednoduchá nebo složená škrobová zrna.
C. Provede se tenkovrstvá chromatografie (2.2.27) za použití desky s vrstvou silikagelu G pro TLC R.
Zkoušený roztok. 5,0 g práškované drogy (355) se smíchá s 50 ml lihu R 30 % (V/V), zahřeje se k varu pod zpětným chladičem a pak se odstředí.
Porovnávací roztok. 5 mg asiatikosidu R se rozpustí v methanolu R a zředí se jím na 10 ml.
Na vrstvu se nanese do pruhů po 10 μl obou roztoků a vyvíjí se směsí objemových dílů směsi kyseliny octové R, kyseliny mravenčí R, vody R a ethylacetatu R (11 + 11 + 27 + 100) po dráze 15 cm. Vrstva se usuší na vzduchu, postříká se anisaldehydem RS a suší se při 100 °C až 105 °C. Pozoruje se v denním světle. Na chromatogramu porovnávacího roztoku je v dolní třetině zelenomodrá skvrna (asiatikosid). Na chromatogramu zkoušeného roztoku je skvrna odpovídající polohou a zbarvením skvrně na chromatogramu porovnávacího roztoku (asiatikosid), pod ní je fialová skvrna (madekasosid), blízko čela chromatogramu je světle modrá skvrna (kyselina asiatiková) a bezprostředně pod ní růžově fialová skvrna (kyselina madekasová). V dolní polovině chromatogramu zkoušeného roztoku jsou mezi startem a skvrnou odpovídající madekasosidu hnědé, šedé a hnědozelené skvrny a nad skvrnou odpovídající asiatikosidu hnědožluté nebo světle žluté skvrny.
Zkoušky na čistotu
Cizí příměsi (2.8.2). Nejvýše 7 %, z toho nejvýše 5 % podzemních orgánů a nejvýše 2 % dalších cizích příměsí.
Ztráta sušením (2.2.32). Nejvýše 10,0 %; 1,000 g práškované drogy se suší 2 h v sušárně při 100 °C až 105 °C.
Celkový popel (2.4.16). Nejvýše 12,0 %.
Stanovení obsahu
Provede se kapalinová chromatografie (2.2.29).
Zkoušený roztok. 5,0 g práškované drogy (355) se extrahuje 8 h v Soxhletově přístroji se 100 ml methanolu R. Po ochlazení se roztok zředí methanolem R na 100,0 ml a zfiltruje se (0,45 μm). 2,0 ml filtrátu se zředí methanolem R na 20,0 ml.
Porovnávací roztok. 20,0 mg asiatikosidu R se rozpustí v methanolu R, je-li třeba za použití ultrazvukové lázně, a zředí se jím na 20,0 ml. 2,0 ml tohoto roztoku se zředí methanolem R na 100,0 ml.
Chromatografický postup se obvykle provádí za použití:
- nerezové ocelové kolony délky 0,25 m a vnitřního průměru 4 mm naplněné silikagelem oktadecylsilanizovaným pro chromatografii R (5 μm),
- mobilní fáze při průtokové rychlosti 1,0 ml/min:
- mobilní fáze A - acetonitril pro chromatografii R,
- mobilní fáze B - 3 ml kyseliny fosforečné R se zředí vodou R na 1000 ml,

Čas (min)	Mobilní fáze A % (V/V)	Mobilní fáze B % (V/V)
0 - 65	22	78
65 - 66	55	45
66 - 76	95	5
76 - 85	22	78

- spektrofotometrického detektoru, 200 nm.
Nastříkne se po 20 μl obou roztoků.
Vypočítá se odezvový faktor pro asiatikosid ze vztahu:
$R_f=\frac{A_1.V_1.100}{m_1.{HPLC}_P},$
v němž značí:
A₁ - plochu píku odpovídajícího asiatikosidu na chromatogramu porovnávacího roztoku,
V₁ - objem porovnávacího roztoku v mililitrech,
m₁ - hmotnost asiatikosidu v porovnávacím roztoku v miligramech,
HPLC_P - stanovená čistota asiatikosidu.
Vypočítá se průměrný odezvový faktor pro asiatikosid ze vztahu:
${\stackrel{-}{R}}_f=\frac{\sum _{i=1}^N{R}_{fi}}{N},$
v němž značí:
$\sum _{i=1}^N{R}_{fi}-součetodezvovýchfaktorůasiatikosidunachromatogramechporovnávacíchroztoků,$
N - počet nástřiků porovnávacích roztoků (N = 4, nejméně).
Vypočítá se celkový obsah derivátů triterpenu, počítáno jako asiatikosid (C₄₈H₇₈O₁₉), ze vztahu:
$\frac{V}{m}\frac{A+B.\mathrm{1,017}+C.\mathrm{0,526}+D.\mathrm{0,509}}{{\stackrel{-}{R}}_f},$
v němž značí:
V - objem zkoušeného roztoku v mililitrech,
m - hmotnost drogy ve zkoušeném roztoku v miligramech,
A - plochu píku odpovídajícího asiatikosidu na chromatogramu zkoušeného roztoku,
B - plochu píku odpovídajícího madekasosidu na chromatogramu zkoušeného roztoku,
C - plochu píku odpovídajícího kyselině madekasové na chromatogramu zkoušeného roztoku,
D - plochu píku odpovídajícího kyselině asiatikové na chromatogramu zkoušeného roztoku,
R̅_f - průměrný odezvový faktor pro asiatikosid.
Relativní retenční čas vztažený k rozpouštědlu:
- madekasosid: asi 5,8;
- asiatikosid: asi 8,1;
- kyselina madekasová: asi 17,6;
- kyselina asiatiková: asi 21,7.
Uchovávání
Chráněna před světlem.
Následující vzor chromatogramu je pouze pro informaci a tato část není součástí požadavků článku.

Obr. 1 Vzorový chromatogram Centellae asiaticae herba pro zkoušku Stanovení obsahu
1 = rozpouštědlo, 2 = madekasosid, 3 = asiatikosid, 4 = kyselina madekasová, 5 = kyselina asiatiková
“