64. V příloze části 6 Speciální část, kapitola 6.1 Léčivé a pomocné látky, se za článek Cyclophosphamidum doplňuje článek Cynosbati pseudo-fructus, který zní:
„
Cynosbati pseudo-fructus
Šípek
Synonyma. Fructus cynosbati, Rosae pseudo-fructus
Je to usušený nepravý plod se zbytky suchého kalicha druhu Rosa canina L., R. pendulina L. a jiných druhů rodu Rosa zbavené nažek.
Obsahuje nejméně 0,3 % kyseliny askorbové (C₆H₈O₆; M_r 176,1), vztaženo na vysušenou drogu.
Vlastnosti
Makroskopický a mikroskopický popis, viz Zkoušky totožnosti A a B.
Zkoušky totožnosti
A. Úlomky dužnaté češule se zbytky redukovaného kalicha. Češule je světle růžová až oranžově růžová, svrchní strana vypouklá, lesklá, silně svraštělá, vnitřní strana světlejší s roztroušenými pentlicovitými chlupy.
B. Droga se upráškuje (355). Prášek je oranžově žlutý. Pozoruje se pod mikroskopem v chloralhydratu RS. Práškovaná droga je charakteristická těmito znaky: pokožka na svrchní straně z buněk s oranžově žlutým obsahem, krytých silnou kutikulou; pokožka na vnitřní straně z tenkostěnných buněk obsahujících krystaly a občas i hranoly šťavelanu vápenatého; roztroušené zdřevnatělé buňky, rovnostěnné buňky se ztlustlými tečkovanými stěnami tvořící bázi chlupů; dlouhé jednobuněčné chlupy až 2 mm dlouhé a 30 μm až 45 μm silné, ostře zašpičatělé se silně ztlustlými stěnami, kryté voskovitou kutikulou, na povrchu někdy spirálovitě rýhovanou; četné oranžově žluté chromatofory.
C. Provede se tenkovrstvá chromatografie (2.2.27) za použití desky s vrstvou silikagelu F₂₅₄ pro TLC R.
Zkoušený roztok. 5 g práškované drogy (355) se protřepává 30 min s 25 ml lihu 96% R a pak se zfiltruje.
Porovnávací roztok. 10 mg kyseliny askorbové R se rozpustí v 5,0 ml lihu R 60 % (V/V).
Na vrstvu se nanese 20 μl zkoušeného roztoku a 2 μl porovnávacího roztoku. Vyvíjí se směsí objemových dílů kyseliny octové R, acetonu R, methanolu R a toluenu R (5 + 5 + 20 + 70) po dráze 15 cm. Vrstva se usuší na vzduchu a pozoruje se v ultrafialovém světle při 254 nm. Na chromatogramu zkoušeného roztoku je skvrna zhášející fluorescenci odpovídající polohou hlavní skvrně na chromatogramu porovnávacího roztoku. Vrstva se postříká roztokem dichlorfenolindolfenolatu sodného R (0,2 g/l) v lihu 96% R a pozoruje se v denním světle. Na chromatogramu zkoušeného roztoku je bílá skvrna na růžovém pozadí, odpovídající polohou a zbarvením hlavní skvrně na chromatogramu porovnávacího roztoku. Na chromatogramu zkoušeného roztoku je v blízkosti čela intenzivní oranžově žlutá skvrna a v horní třetině žlutá skvrna (karotenoidy).
Zkoušky na čistotu
Cizí příměsi (2.8.2). Nejvýše 1 %.
Ztráta sušením (2.2.32). Nejvýše 10,0 %; 1,000 g práškované drogy (355) se suší v sušárně při 100 °C až 105 °C.
Celkový popel (2.4.16). Nejvýše 5,0 %.
Stanovení obsahu
Zkoušený roztok. 0,500 g čerstvě práškované drogy (710) se v baňce s kulatým dnem smíchá s 50,0 ml roztoku kyseliny šťavelové R (20 g/l) v methanolu R, vaří se 10 min pod zpětným chladičem, pak se ochladí ve vodě s ledem na 15 °C až 20 °C a zfiltruje se (filtrát se použije také pro roztok A). 2,0 ml filtrátu se převedou do 50ml kuželové baňky a za stálého mírného protřepávání se postupně přidají 2,0 ml dichlorfenolindolfenolatu sodného RS, přesně po 60 s 0,5 ml roztoku thiomočoviny R (100 g/l) v lihu R 50 % (V/V) a 0,7 ml dinitrofenylhydrazinu v kyselině sírové RS. Zahřívá se 75 min pod zpětným chladičem při 50 °C a pak se ihned vloží na 5 min do vody s ledem. Za intenzivního míchání ve vodě s ledem se po kapkách přidává 5,0 ml směsi složené z 12 ml vody R a 50 ml kyseliny sírové R, což trvá 90 s až 120 s. Po 30 min stání při pokojové teplotě se měří absorbance (2.2.25) při 520 nm za použití roztoku A jako kontrolního roztoku.
Roztok A. 2,0 ml filtrátu získaného při přípravě zkoušeného roztoku se upraví stejně, jak je popsáno v odstavci zkoušený roztok s tím rozdílem, že se dinitrofenylhydrazin v kyselině sírové RS přidá těsně před měřením absorbance.
Porovnávací roztok. 40,0 mg kyseliny askorbové R se rozpustí v čerstvě připraveném roztoku kyseliny šťavelové R (20 g/l) v methanolu R a zředí se stejným rozpouštědlem na 100,0 ml. 5,0 ml tohoto roztoku se zředí stejným rozpouštědlem na 100,0 ml (použije se také k přípravě roztoku B). 2,0 ml tohoto roztoku se upraví podle postupu pro filtrát v odstavci Zkoušený roztok. Měří se absorbance (2.2.25) při 520 nm za použití roztoku B jako kontrolního roztoku.
Roztok B. 2,0 ml roztoku získaného při přípravě porovnávacího roztoku se upraví stejně, jak je popsáno v odstavci Zkoušený roztok s tím, že se dinitrofenylhydrazin v kyselině sírové RS přidá těsně před měřením absorbance.
Obsah kyseliny askorbové se vypočítá ze vztahu:
$\frac{\mathrm{2,5}.A_1.m_2}{A_2.m_1},$
v němž značí:
A₁ - absorbanci zkoušeného roztoku,
A₂ - absorbanci porovnávacího roztoku,
m₁ - hmotnost zkoušené drogy v gramech,
m₂ - hmotnost kyseliny askorbové v gramech.
Uchovávání
V dobře uzavřených obalech, chráněn před světlem.
“