Dodatek 3
Pufry pro testovací postupy
OBECNĚ: Neotevřené sterilizované pufry lze skladovat po dobu až jednoho roku.
1. Pufry pro extrakci
1.1. Extrakční pufr (50 mM fosfátový pufr, pH 7,0)
Tento pufr se používá k extrakci bakterie z rostlinných tkání homogenizací nebo protřepáním.
| Na2 HPO4 (bezvodý) | 4,26 g |
| KH2PO4 | 2,72 g |
| Destilovaná voda | 1,00 l |
Složky se rozpustí, zkontroluje se pH a provede se sterilizace v autoklávu při 121 °C po dobu 15 min.
Užitečné mohou být následující složky:
| Účel | Množství (na litr) | |
|---|---|---|
| Lubrolové vločky | Protisrážlivý prostředek (*) | 0,5 g |
| DC silikonový odpěňovač | Odpěňovací činidlo (*) | 1,0 ml |
| Tetrasodiumpyrofosfát | Antioxidační činidlo | 1,0 g |
| Polyvinylpyrrolidon-40 000 (PVP ‒ 40) | Vázání inhibitorů PCR | 50 g |
| (*) pro použití při extrakci homogenizací | ||
1.2. Peletový pufr (10 mM fosfátový pufr, pH 7,2)
Tento pufr se používá pro resuspenzi a ředění extraktů z výkrojků z pupkových částí bramborových hlíz poté, co byly odstřeďováním koncentrovány do pelety.
| Na2HPO4 .12H2O | 2,7 g |
| NaH2PO4 . 2H2O | 0,4 g |
| Destilovaná voda | 1,00 l |
Složky se rozpustí, zkontroluje se pH a provede se sterilizace v autoklávu při 121 °C po dobu 15 min.
2. Pufry pro IF test
2.1. Pufry pro IF (10 mM fosfátový pufr ve fyziologickém roztoku (PBS), pH 7,2)
Tento pufr se používá k ředění protilátek.
| Na2HPO4 .12H2O | 2,7 g |
| NaH2PO4 . 2H2O | 0,4 g |
| NaCl | 8,0 g |
| Destilovaná voda | 1,00 l |
Složky se rozpustí, zkontroluje se pH a provede se sterilizace v autoklávu při 121 °C po dobu 15 min
2.2. IF-pufr-Tween
Tento pufr se používá k mytí sklíček.
Přidá se 0,1 % Tween 20 k pufru pro IF.
2.3. Fosfátový pufr v glycerolu, pH 7,6
Tento pufr se používá jako krycí roztok na okénka sklíček na IF testy k zvýšení fluorescence.
| Na2HPO4 .12H2O | 3,2 g |
| NaH2PO4 . 2H2O | 0.15 g |
| Glycerol | 50 ml |
| Destilovaná voda | 100 ml |
Krycí roztoky jsou komerčně dostupné, např. Vectashield® (Vector Laboratories) nebo Citifluor® (Leica).