Dodatek 9
Gramovo barvení v Huckerově modifikaci (Doetsch, 1981) (¹)
Roztok krystalové violeti
Rozpustí se 2 g krystalové violeti v 20 ml 95 % etanolu.
Rozpustí se 0,8 g šťavelanu amonného v 80 ml destilované vody.
Oba roztoky se smíchají.
Lugolův jódový roztok

Jód	1 g
Jodid draselný	2 g
Destilovaná voda	300 ml

Pevné látky se společně rozetřou pomocí tloučku v misce. Nasypou se do vody a míchají se v uzavřené nádobě do rozpuštění.
Safraninový roztok kontrastního barviva
Zásobní roztok:

Safranin O	2,5 g
95 % etanol	100 ml

Zamíchá se a uloží se.
Ředění: 1:10 pro přípravu pracovního roztoku.
Postup barvení
Grampozitivní bakterie se zbarví fialově modře, gramnegativní bakterie se zbarví růžovočerveně.
(¹) Mohou se také použít komerčně dostupné roztoky nebo barvicí soupravy.

1. Připraví se roztěry, vysuší se na vzduchu a fixují se zahřátím.

2. Sklíčko se zalije roztokem krystalové violeti a nechá se působit 1 minutu.

3. Krátce se omyje pod tekoucí vodou.

4. Zalije se Lugolovým jódovým roztokem a nechá se působit po dobu jedné minuty.

5. Opláchne se pod tekoucí vodou a vysuší se savým papírem.

6. Odbarvuje se pomocí po kapkách přidávaného 95 % etanolu tak dlouho, pokud se vyplavuje barvivo, nebo ponořením za jemného pohybování do etanolu na dobu 30 sekund.

7. Opláchne se pod tekoucí vodou a vysuší se savým papírem.

8. Zalije se safraninovým roztokem a nechá se působit 10 s.

9. Opláchne se pod tekoucí vodou a vysuší se savým papírem.