Část I.
PLEMENITBA SKOTU
1. Odběr spermatu
2. Hodnocení spermatu
**) Vzorky jsou odebírány sterilně při teplotě -196 °C a vyšetřovány bezprostředně po rozmrazení.
*) Vzorky jsou odebírány sterilně při teplotě 1 až 3 °C a vyšetřovány bezprostředně po přípravě.
Poznámky:
| Hodnocení: | hodnotí se: | způsob hodnocení: |
|---|---|---|
| čerstvého spermatu | zdravotní nezávadnost spermat u odebíraných býků | nejméně jednou za půl roku veterinárním vyšetřením |
| objem | měřením nebo vážením u každého ejakulátu s přesností na 1 cm3 (g) | |
| barva, konzistence a pach | smyslovým posouzením | |
| obsah přimísenin | smyslovým posouzením ve sběrači a mikroskopicky | |
| hustota spermatu | fotometrem u každého ejakulátu (kontrolní propočty případně kalibrace přístrojů se provádějí v Bűrkerově komůrce) | |
| aktivita spermatu (u každého ejakulátu) | mikroskopicky při zvětšení 1 : 200 až 300 a při teplotě 39 ± 1°C, kdy se odhadem zjišťuje procentické zastoupení spermií pohybujících se vpřed za hlavičkou | |
| výskyt abnormálních spermií | mikroskopicky při zvětšení 1 : 1000 až 1500 a vyjadřuje se v %; u provozních býků nejméně jednou za měsíc | |
| krátkodobě*) uchovávaného spermatu | aktivita spermatu | jako u čerstvého spermatu |
| počet aktivních spermií v inseminační dávce | v 10 čtvercích v Bűrkerově komůrce tak, že průměrný počet spermií ve čtverci se přepočte na velikost inseminační dávky a vynásobením počtu všech spermií procentem aktivity se zjistí počet aktivních spermií v inseminační dávce | |
| dlouhodobě**) uchovávaného spermatu | aktivita spermatu (po rozmražení) | u každého ejakulátu na pracovišti, kde bylo sperma zmraženo a dále u každého ejakulátu před expedicí tak, že: - pejeta se rozmrazí ve vodní lázni o teplotě 39 ± 1 °C (pejeta o obsahu 0,25 ml za 15-20 vteřin, o obsahu 0,50 ml za 20 až 30 vteřin), její obsah se promíchá a vypustí do zkumavky s roztokem citronanu sodného, aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu; - peleta se rozpustí v malé zkumavce o teplotě 39 ± 1 °C v roztoku citronanu sodného a promíchá se; aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu |
| počet aktivních spermií v inseminační dávce | jako u krátkodobě uchovávaného spermatu |
Hodnocení spermatu se provádí na základě posouzení jednotlivých vlastností spermatu podle charakteristických znaků a projevů metabolizmu při teplotě 20 až 25 °C.
1.1. Odběr spermatu se provádí podle plánu stanoveného individuálně pro každého býka, po řádném vyčištění býka a omytí a usušení předkožky, pomocí umělé vagíny vyjmuté z termostatu o teplotě cca 40 °C, jejíž vložka je ověřená na nepropustnost vody a vzduchu.
1.2 Všechny pomůcky přicházející bezprostředně do styku se spermatem musí být sterilní.
Postupy získávání, posuzování a zpracování spermatu, uchovávání a výdeje inseminačních dávek
A.
1.3 Po odběru je sběrač se spermatem, označený značkou a číslem státního registru plemenného býka, oddělen a předán do laboratoře k hodnocení a zpracování. Mikroskopické posouzení čerstvého spermatu se provádí do 10 minut po odběru.
3.5. Bezprostředně po přidávání antibiotik je ředěné sperma uchováváno nejméně 45 minut při teplotě 3 - 5°C
3.1. Veškeré předměty přicházející do styku se spermatem musí být sterilní.
3.2. Produkty živočišného původu používané při ošetření spermatu musí být zdravotně nezávadné.
3.3. Sperma se ředí při pokojové teplotě 20 až 25 °C; k ředění se používají pouze média, která po konzervaci uchovávají dobrou oplozovací schopnost spermatu a jeho zdravotní nezávadnost; ředí se technologickým postupem podle pokynů výrobce ředidla.
3. Zpracovávání spermatu
4. Uchovávání a výdej inseminačních dávek
| 4.1. | Sperma se po zpracování uchovává | a) krátkodobě při teplotě 1 až 3 °C b) dlouhodobě při teplotě –196 °C | |||
| 4.2 | Krátkodobě uchovávané sperma se vydává z inseminačních stanic podle podmínek daných technologickým postupem | ||||
| 4.3. | Dlouhodobě uchovávané inseminační dávky ve formě pejet nebo pelet se ukládají do provozního kontejneru, kde jsou trvale ponořeny v tekutém dusíku při teplotě -196 °C. Po hodnocení aktivity se inseminační dávky ukládají do zásobního kontejneru a z inseminační stanice se expeduje nejdříve po 30 dnech po odběru a zmrazení. | ||||
| 4.4. | Pejety jsou uloženy | a) | v zásobních kontejnerech v kelímcích s vatovou zátkou dole; v těchto kelímcích jsou uloženy odděleně podle býků a data odběru s vloženým lístkem, na kterém je uvedena značka a číslo státního registru a jméno býka, datum odběru, počet uložených inseminačních dávek. V případě uložení inseminačních dávek z více skoků do kelímků s menším průměrem je tento údaj napsán nesmazatelnou barvou na vnější straně kelímku. Na expediční list jsou vždy uváděna data jednotlivých skoků, počet inseminačních dávek a státní registr býka, | ||
| b) | v transportních kontejnerech zpravidla v kelímcích o malém průměru, na které se uvádí stejné údaje jako v bodě a) a které jsou vždy naplněny tekutým dusíkem, | ||||
| 4.5. | Pelety jsou uloženy | a) | v zásobních kontejnerech v kelímcích, které se ukládají na kovové plošinky v kanystrech a víčka kelímků jsou opatřena třemi až čtyřmi otvory; kelímek je naplněn tak, aby nad peletami bylo asi 7 mm tekutého dusíku, | ||
| b) | v transportních kontejnerech v kovových pouzdrech; nad peletami ie kovové závaží, pouzdra jsou uzavřena víčky a všechny pelety jsou trvale ponořeny v dusíku | ||||
| 4.6. | Kontejnery používané pro skladování a přepravu spermatu jsou náležitě desinfikovány před každým naplněním dusíkem, který nebyl použit pro jiné produkty živočišného původu. Interval desinfekce je dán typem a používáním kontejneru. | ||||
| na 1 ml ředidla | 500 mj streptomycinu |
| 500 mj penicilinu | |
| 150 μg linkomycinu | |
| 300 μg spektinomycinu |
Může být použita i jiná kombinace antibiotik, pokud mají rovnocenný účinek proti kampylobakteriím, leptospirám a mykoplazmám.
3.4. Do spermatu jsou přidávána antibiotika tak, aby v konečném naředění bylo dosaženo nejméně těchto koncentrací:
Poznámka:
2. Požadavky na identifikaci:
2.1. Obal spermatu musí být vždy zřetelně označen značkou a číslem státního registru plemenného býka.
Požadavky na kvalitu a identifikaci spermatu a inseminačních dávek
B.
| Čerstvé sperma | a) neobsahuje původce nebezpečných nákaz a nemocí, v intervalu 6 měsíců je laboratorně vyšetřováno na přítomnost patogenních mikroorganismů (včetně patogenních plísní), b) neobsahuje přimíseniny ani shluky spermií, c) má bílou barvu s odstínem šedým až krémovým (dovoleno je žlutavé zabarvení) a ostatní charakteristické vlastnosti (pach a zrnitost), d) hustota nemá být nižší než 700 000 spermií v 1 mm3, e) aktivita spermií je nejméně 70 %, f) obsahuje nejméně 80 % morfologicky normálních spermií a nejvýše 10 % primárních změn. |
| krátkodobě uchovávané sperma | a) vyhovuje ustanovením pro čerstvé sperma a po zředění a konzervování b) neobsahuje patogenní mikroorganizmy, včetně patogenních plísní, c) aktivita spermií před použitím je nejméně 50 %, d) v jedné inseminační dávce je nejméně 10 x 106 aktivních spermií; u býků zlepšovatelů je možno tento počet snížit za předpokladu dobrého zabřezávání |
| dlouhodobě uchovávané sperma | a) po zředění a konzervování vyhovuje požadavkům podle 1.2. písm. a), b) a d), b) aktivita spermií po rozmrazení je nejméně 30 %. |
1. Požadavky na kvalitu:
| kelímek | 1. na vnějším obvodu | a) značka a číslo státního registru býka b) datum odběru |
| 2. dovnitř se vkládá štítek, který obsahuje: | a) číslo státního registru býka b) datum odběru c) počet pelet d) aktivita po rozmrazení | |
| kovové pouzdro | na boční straně | a) značka a číslo státního registru býka b) datum odběru |
2.3. Označení pelet:
| kód plemene | značka státního registru | číslo státního registru | datum odběru spermatu | kód inseminační stanice (kód Evropské unie, případně kód národní) | sérologický status dárce vzhledem k IBR/ IPV |
Poznámka:
Pokud je uváděn národní kód inseminační stanice, uvádí se za ním ISO kód země
Status býka k IBR/IPV se značí písmeny IP v případě, že býk je IBR pozitivní, je-li býk negativní, zůstanou dvě místa volná.
2.2. Označení pejet: Pejeta se zmrazeným spermatem je značena (směrem od zavařeného konce):
| účel | technické vybavení |
|---|---|
| odběr spermatu | připouštědlo (v místnosti nebo venku), fantom, termostat, kompletní umělé vagíny, včetně sběračů a tepelné izolace, další pomůcky a prostředky pro odběr spermatu zejména sterilní vazelína, jednorázové rukavice, teploměr, desinfekční prostředky |
| hodnocen spermatu | předvážky, fotometr, mikroskop s fázovým kontrastem a výhřevným stolkem, vodní lázeň, termostat, mikroskop se zvětšením 1 : 1000 až 1500, poloautomatické pipety 25 μl, 50 μl, 100 μl, Bűrkerova počítací komůrka, melanžéry na červené a bílé krvinky, tenkostěnné zkumavky, barvicí kyvety, automatický dávkovač po 10 ml, imerzní olej, diferenciální barviva, potřebné laboratorní sklo |
| zpracování spermatu | termostat, oscilační stolek, chladnice nebo chladící vitrína, zařízení na plnění, zatavování a značení pejet, rampy, širokohrdlém kontejnery s termočlánkem nebo automatickým zmrazovačem, teploměry, ředidla, antibiotika a pejety |
| uložení spermatu | zásobník s rozvody tekutého dusíku, provozní kontejnery, zásobní kontejnery s kanystry pro uložení pejet nebo pelet, transportní kontejnery, kelímky, polystyrénové nádoby na tekutý dusík, rukavice, pomůcky a ochranný štít pro manipulaci s tekutým dusíkem |
| dezinfekce a sterilizace | horkovzdušný sterilizátor, autokláv, desinfekční prostředky, zdroj teplé vody, destilovaná voda a redestilovaná voda |
C.
Technické vybavení inseminační stanice býků
Osoba oprávněná k provozování inseminační stanice vede písemně nebo pomocí elektronických medií:
| druh evidence | obsah: |
|---|---|
| stájová evidence plemenného býka | a) číslo ušní známky, b) číslo státního registru plemenného býka c) datum narození |
| evidence o ustájených býcích | o příjmu býka na stanici, jeho přesunu případně úhynu |
| záznam o odběru býků | a) množství odebraného ejakulátu, b) kvalita odebraného ejakulátu, c) stupeň ředění, d) předpokládaná výroba inseminačních dávek |
| denní záznam o výrobě inseminačních dávek | |
| záznam o morfologickém vyšetření spermatu | zejména výskyt abnormálních spermií |
| záznamy o zásobách a uložení inseminačních dávek | |
| expediční list | záznamy o prodeji nebo přesunu inseminačních dávek |
D.
Druh a obsah evidencí vedených na inseminační stanici býků a způsob jejich předávání osobě pověřené vedením ústřední evidence
1.2. z inseminace vyloučí plemenice s nefyziologickým výtokem z pohlavních orgánů, s příznaky nákazy nebo jiného onemocnění, plemenice mimo říji a plemenice neoznačené a přihlíží k hmotnosti jalovice a době po otelení krávy,
Technologické a hygienické postupy při inseminaci a skladování inseminačních dávek
E.
1. Před inseminací plemenice provede osoba oprávněná nebo chovatel (§ 17 zákona) reprodukční anamnézu, a to zejména:
2. Plemenice se inseminují pokud vykazují příznaky říje, nejlépe ve druhé polovině říje. Trvají-li příznaky říje druhý den po inseminaci, může hlásit chovatel plemenici k reinseminaci. Při reinseminaci po dobu 16 dnů od poslední inseminace musí být použito sperma stejného býka..
3. Před inseminací je dodržován technologický postup přípravy inseminační dávky v
| pejetě | pejeta se rozmrazuje ve vodní lázni o teplotě asi 35 °C s vatovou zátkou dole, s doporučenou dobou rozmrazování 7 vteřin u 0,25 ml pejety a 15 vteřin u 0,5 ml pejety; po rozmrazení a osušení se pejeta zasune do inseminační aparatury tak, že je vatová zátka dole, horní konec pejety se odstřihne a po nasazení krycí pipety se provede zkouška těsnosti, přičemž se dbá, aby nedocházelo k tepelným šokům, |
| v peletě | peleta se samovolně rozmrazuje v samostatné ampulí s citronanem sodným a postupně se nasává inseminační pipetou frakce bez spermií, malé množství vzduchu a frakce bohatá na spermie |
4. Při inseminaci postupuje osoba oprávněná k provádění inseminace nebo chovatel tak, že dbá o hygienu a dodržuje postup vyšetření a vlastní inseminace plemenic, výsledek inseminace zjišťuje nejpozději do konce 3. kalendářního měsíce po měsíci poslední inseminace (neplatí pro masná plemena a plemenice bez tržní produkce mléka).
5. Inseminační dávky má oprávněná osoba nebo chovatel uloženy v transportním kontejneru. Jeho desinfekce se provádí jednou za 4 měsíce, v případě potřeby častěji. O provedené desinfekci se vedou záznamy.
1.1. po posouzení záznamů v průvodním dokladu plemenice zhodnotí dobu po jejím otelení do ohlášení říje, případně dobu od poslední inseminace,
**) V případě desinfekce servisním způsobem je k dispozici doklad o jejím provedení.
*) V případě sterilizace servisním způsobem je k dispozici doklad o jejím provedení.
Poznámky:
| kompletní inseminační brašna | která obsahuje účinné desinfekční prostředky, desinfekční mýdlo, teploměr, rukavice jednorázové, vata buničitá, pinzety, kovové inseminační aparatury krycí pipety, v případě používání pelet i skleněné pipety, tlačky a peany, |
| termobox na rozmrazování inseminačních dávek, případně termoláhve, | |
| zdroj teplé vody, | |
| transportní kontejner s vnitřním vybavením | |
| vybavení pro sterilizaci*) | |
| chemikálie na dezinfekci kontejnerů**) |
Technické vybavení pro provádění inseminace
F.
3. Osoba oprávněná k provádění inseminace vede „inseminační výkaz“ písemnou formou nebo pomocí elektronických médií a předává jej do konce kalendářního měsíce následujícího po kalendářním měsíci, v němž byla inseminace provedena, jako vstupní doklad osobě pověřené vedením ústřední evidence.
2. Osoba oprávněná k provádění inseminace předává chovateli s vyplněným průvodním listem skotu též pejety použitých inseminačních dávek.
1. Pro každou plemenici je vystaven průvodní list skotu, ve kterém chovatelé a oprávněné osoby vedou záznamy o inseminaci a předávají je osobě pověřené vedením ústřední evidence.
G.
Obsah a způsob vedení záznamů o inseminaci a jejich předávání osobě pověřené k vedení ústřední evidence
4. Způsob předávání dokladů, včetně jejich oprav, stanoví osoba pověřená vedením ústřední evidence, která zpracovává, vyhodnocuje a zveřejňuje výsledky inseminace.