b) Validované selektivní živné půdy
Živná půda SMSA (Englebrecht, 1994 ve znění Elphinstone et al., 1996)
| Základní živná půda | |
| Casamino kyseliny (Difco) | 1,0 g |
| Bacto-Pepton (Difco) | 10,0 g |
| Glycerol | 5,0 ml |
| Bacto-Agar (Difco) (viz pozn. 2) | 15,0 g |
| Destilovaná voda | 1,00 l |
Rozpustí se složky a sterilují v autoklávu při teplotě 121 °C po dobu 15 minut.
Ochladí se na 50 °C a přidá filtrem sterilizovaný vodný roztok následujících složek, aby se získala stanovená konečná koncentrace:
| Krystalová violeť (Sigma) | 5 mg/l |
| Polymixin-B-sulfát (Sigma P1004) | 600 000 U (přibližně 100 mg)/l |
| Bacitracin (Sigma B-0125) | 1 250 U (přibližně 25 mg)/l |
| Chloramfenikol (Sigma C-3175) | 5 mg/l |
| Penicilín-G (Sigma P-3032) | 825 U (přibližně 0,5 mg)/l |
| 2,3,5-trifenyltetrazolium chlorid (Sigma) | 50 mg/l |
Poznámky:
Roztoky antibiotik se uchovávají a skladují při teplotě 4 °C v temnu a musí se spotřebovat do 1 měsíce.
Misky s médiem by měly být před použitím zbaveny povrchové kondenzace.
Nutno zabránit přílišnému vysušení média.
Každá nově připravená šarže živné půdy by měla být podrobena kontrole kvality živné půdy roztěrem suspense referenční kultury R. solanacearum na médium (viz dodatek 3) a pozorováním, zda se po 2 až 5 dnech při teplotě 28 °C objeví typické kolonie.
1. Použití jiných než výše uvedených reagencí může ovlivnit růst R. solanacearum.
2. Místo Bacto-Agar (Difco) může být použit Oxoid Agar #1. V takovém případě bude růst R. solanacearum pomalejší, ale může to také omezit růst konkurenčních saprofytů. Typické kolonie R. solanacearum se mohou tvořit o 1-2 dny déle a červené zbarvení může být světlejší a rozptýlenější než při použití Bacto-Agaru.
3. Zvýšení koncentrace bacitracinu na 2 500 U/l může omezit populace konkurenčních bakterií bez ovlivnění růstu Ralstonia solanacearum.