10. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ DUSITANŮ
A. KVALITATIVNÍ STANOVENÍ
1. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ
Tato metoda je vhodná ke kvalitativnímu stanovení dusitanů v kosmetických prostředcích, zejména v krémech a pastách.
2. PRINCIP
Přítomnost dusitanu indikuje vznik zbarvených derivátů s 2-aminobenzaldehyd-fenylhydrazonem (Nitrin®).
3. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE
Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší
3.1 Zředěná kyselina sírová: 2 ml koncentrované kyseliny sírové se zředí 11 ml destilované vody.
3.2 Zředěná kyselina chlorovodíková: 1 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové se zředí 11 ml destilované vody.
3.3 Methanol
3.4 Roztok 2-aminobenzaldehyd-fenylhydrazonu (reakční činidlo Nitrin®) v methanolu
Naváží se 2,0 g Nitrinu® a převede se kvantitativně do odměrné baňky na 100 ml. Po kapkách se přidají 4 ml zředěné kyseliny chlorovodíkové (3.2) a protřepe se. Doplní se po rysku methanolem a míchá, dokud se roztok úplně nevyčeří. Roztok se uchovává v hnědé skleněné lahvi (4.3).
4. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
4.1 Kádinky na 50 ml
4.2 Odměrná baňka na 100 ml
4.3 Hnědá skleněná láhev na 125 ml
4.4 Skleněná deska, 10 x 10 cm
4.5 Špachtle z plastu
4.6 Filtrační papír, 10 x 10 cm
5. POSTUP
5.1 Část analyzovaného vzorku se rovnoměrně rozetře na skleněnou desku (4.4) tak, aby byl povrch pokryt vrstvou nejvýše 1 cm silnou.
5.2 List filtračního papíru (4.6) se nasákne destilovanou vodou. Položí se na vzorek a přitiskne špachtlí z plastu (4.5).
5.3 Počká se asi 1 minutu a do středu filtračního papíru se nanesou:
— 2 kapky zředěné kyseliny sírové (3.1),
— poté dvě kapky roztoku Nitrinu® (3.4).
5.4 Po 5 až 10 sekundách se filtrační papír odstraní a prohlédne se proti dennímu světlu. Červenofialové zbarvení indikuje přítomnost dusitanů.
Je-li obsah dusitanů nízký, změní se červenofialové zbarvení během 5 až 15 sekund na žluté. Je-li přítomno velké množství dusitanů, dojde k této barevné změně až po 1 nebo 2 minutách.
6. POZNÁMKA
Intenzita červenofialového zbarvení a doba, která uplyne před změnou na žlutou, naznačují obsah dusitanů ve vzorku.
B. KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ
1. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ
Metoda popisuje kvantitativní stanovení dusitanů v kosmetických prostředcích.
2. DEFINICE
Obsah dusitanů ve vzorku, stanovený touto metodou, se vyjadřuje v hmotnostních procentech dusitanu sodného.
3. PRINCIP
Po zředění vzorku vodou a vyčeření se nechá proběhnout reakce přítomných dusitanů se sulfanilamidem a N-1-naftylethylendiaminem a absorbance vzniklého zbarvení se měří při 538 nm.
4. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE
Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší
4.1 Čeřidla: tato činidla nelze používat déle než jeden týden po přípravě.
4.1.1 Carrezovo činidlo I:
106 g hexakyanoželeznatanu draselného K4Fe(CN)6∙3H2O se rozpustí v destilované vodě a zředí vodou na 1000 ml.
4.1.2 Carrezovo činidlo II:
219,5 g octanu zinečnatého Zn(CH3COO)2∙2H2O a 30 ml ledové kyseliny octové se rozpustí v destilované vodě a zředí vodou na 1000 ml.
4.2 Roztok dusitanu sodného:
0,500 g dusitanu sodného se rozpustí v destilované vodě v odměrné baňce na 1000 ml a doplní se vodou po rysku. 10,0 ml tohoto zásobního standardního roztoku se zředí na 500 ml; 1 ml výsledného roztoku = 10 μg NaNO2.
4.3 Roztok hydroxidu sodného, 1 mol/l
4.4 Roztok sulfanilamid-hydrochloridu, 0,2%:
2,0 g sulfanilamidu se za zahřívání rozpustí v 800 ml vody. Po ochlazení se za míchání přidá 100 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Zředí se vodou na 1000 ml.
4.5 Kyselina chlorovodíková, 5 mol/l
4.6 N-1-naftylové činidlo:
Tento roztok se musí připravit v den použití. Rozpustí se 0,1 g dihydrochloridu N-naftylethylendiaminu ve vodě a zředí se vodou na 100 ml.
5. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
5.1 Analytické váhy
5.2 Odměrné baňky na 100, 250, 500 a 1000 ml
5.3 Nedělené nebo dělené pipety
5.4 Odměrné válce na 100 ml
5.5 Skládaný filtrační papír, bez dusitanů, průměr 15 cm
5.6 Vodní lázeň
5.7 Spektrofotometr a kyvety s optickou drahou 1 cm
5.8 pH-metr
5.9 Mikrobyreta na 10 ml
5.10 Kádinky na 250 ml
6. POSTUP
6.1 S přesností na 0,1 mg se naváží asi 0,5 g (m gramů) homogenizovaného vzorku, kvantitativně se převede horkou destilovanou vodou do kádinky na 250 ml (5.10) a doplní horkou destilovanou vodou asi na 150 ml. Kádinka (5.10) se na půl hodiny vloží do vodní lázně (5.6) vyhřáté na 80 °C. Během této doby se obsah občas protřepe.
6.2 Ochladí se na laboratorní teplotu a postupně se za míchání přidají 2 ml Carrezova činidla I (4.1.1) a 2 ml Carrezova činidla II (4.1.2).
6.3 Přidává se 1 mol/l roztok hydroxidu sodného (4.3), dokud se pH neupraví na 8,3. (Použije se pH-metr (5.8)). Obsah se kvantitativně převede do odměrné baňky na 250 ml (5.2) a doplní destilovanou vodou po rysku.
6.4 Obsah se promíchá a zfiltruje přes skládaný papírový filtr (5.5).
6.5 Do odměrné baňky na 100 ml (5.2) se odpipetuje (5.3) odpovídající alikvotní část (V mililitrů) čirého filtrátu, avšak ne více než 25 ml, a doplní se destilovanou vodou na objem 60 ml.
6.6 Po promíchání se přidá 10,0 ml roztoku sulfanilamid-hydrochloridu (4.4) a poté 6,0 ml 5 mol/l kyseliny chlorovodíkové (4.5). Promíchá se a ponechá stát 5 minut. Přidají se 2,0 ml N-1-naftylového činidla (4.6), promíchá se a ponechá stát 3 minuty. Zředí se vodou po rysku a promíchá.
6.7 Připraví se slepý pokus opakováním operací popsaných v bodech 6.5 a 6.6 bez přídavku N-1-naftylového činidla (4.6).
6.8 Změří se (5.7) absorbance roztoku připraveného podle bodu 6.6 při 538 nm proti roztoku ze slepého pokusu (6.7).
6.9 Z kalibračního grafu (6.10) se odečte obsah dusitanu sodného v mikrogramech na 100 ml roztoku (m1 mikrogramů), odpovídající absorbanci změřené podle bodu 6.8.
6.10 S využitím roztoku dusitanu sodného o koncentraci 10 μg/ml (4.2) se sestrojí kalibrační graf pro koncentrace 0, 20, 40, 60, 80 a 100 μg dusitanu sodného ve 100 ml.
7. VÝPOČET
Obsah dusitanu sodného ve vzorku vyjádřený v hmotnostních procentech se vypočte pomocí následujícího vzorce:
kde:
| m | = hmotnost vzorku odebraného pro analýzu v g (6.1), |
| m1 | = obsah dusitanu sodného v μg zjištěný podle bodu 6.9, |
| V | = počet mililitrů filtrátu použitého pro měření (6.5). |
8. OPAKOVATELNOST
Pro výrobky obsahující asi 0,2 % (m/m) dusitanu sodného nesmí rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení na stejném vzorku překročit absolutní hodnotu 0,005 %.