4. KVALITATIVNÍ STANOVENÍ
4.1 Kvalitativní stanovení barevnou reakcí
4.1.1 POUŽITÉ CHEMIKÁLIE
Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší
4.1.1.1 Papírek s octanem olovnatým
4.1.1.2 Roztok kyseliny chlorovodíkové (1:1)
4.1.2 Postup
4.1.2.1 Kvalitativní stanovení kyseliny thioglykolové pomocí barevné reakce s papírkem s octanem olovnatým
Kapka vzorku se umístí na papírek s octanem olovnatým (4.1.1.1). Pokud se objeví intenzivní žluté zbarvení, je kyselina thioglykolová pravděpodobně přítomna.
Citlivost: 0,5 %.
4.1.2.2 Kvalitativní stanovení anorganických sulfidů vznikem sirovodíku po okyselení
Do zkumavky se převede několik miligramů analyzovaného vzorku. Přidají se 2 ml destilované vody a 1 ml kyseliny chlorovodíkové (4.1.1.2). Uvolní se sirovodík, který lze rozpoznat podle zápachu, a na papírku s octanem olovnatým (4.1.1.1) vzniká černá sraženina sulfidu olovnatého.
Citlivost: 50 ppm.
4.1.2.3 Kvalitativní stanovení siřičitanů vznikem oxidu siřičitého po okyselení
Postupuje se podle bodu 4.1.2.2. Obsah se přivede k varu. Oxid siřičitý lze rozpoznat podle jeho zápachu a jeho schopnosti redukovat například manganisté ionty.
4.2 Kvalitativní stanovení chromatografií na tenké vrstvě
4.2.1 POUŽITÉ CHEMIKÁLIE
Není-li uvedeno jinak, použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší
4.2.1.1 Kyselina thioglykolová, minimální čistota 98 %, stanovena jodometricky
4.2.1.2 2,2'-dithiodi(octová kyselina), minimální čistota 99 %, stanovena jodometricky
4.2.1.3 Kyselina 2-merkaptopropionová (thiomléčná kyselina), minimální čistota 95 %, stanovena jodometricky
4.2.1.4 Kyselina 3-merkaptopropionová, minimální čistota 98 %, stanovena jodometricky
4.2.1.5 3-merkaptopropan-1,2-diol (1-thioglycerol), minimální čistota 98 %, stanovena jodometricky
4.2.1.6 Hotové silikagelové desky pro chromatografii na tenké vrstvě o tloušťce 0,25 mm
4.2.1.7 Hotové desky pro chromatografii na tenké vrstvě s oxidem hlinitým, Merck F 254 E nebo ekvivalentní
4.2.1.8 Kyselina chlorovodíková, koncentrovaná,
4.2.1.9 Ethyl-acetát
4.2.1.10 Chloroform
4.2.1.11 Diisopropylether
4.2.1.12 Tetrachlormethan
4.2.1.13 Ledová kyselina octová
4.2.1.14 Jodid draselný, 1% roztok (m/V) ve vodě
4.2.1.15 Chlorid platičitý, 0,1% roztok (m/V) ve vodě
4.2.1.16 Mobilní fáze
4.2.1.16.1 Ethyl-acetát (4.2.1.9), chloroform (4.2.1.10), diisopropylether (4.2.1.11), kyselina octová (4.2.1.13) (20:20:10:10, V/V/V/V)
4.2.1.16.2 Chloroform (4.2.1.10), kyselina octová (4.2.1.13) (90:20, V/V)
4.2.1.17 Detekční činidla
4.2.1.17.1 Bezprostředně před použitím se smísí stejné objemy roztoku 4.2.1.14 a roztoku 4.2.1.15.
4.2.1.17.2 Roztok bromu, 5 % (m/V):
Rozpustí se 5 g bromu ve 100 ml tetrachlormethanu (4.2.1.12).
4.2.1.17.3 Roztok fluoresceinu, 0,1 % (m/V):
100 mg fluoresceinu se rozpustí ve 100 ml ethanolu.
4.2.1.17.4 Heptamolybdenan hexaamonný, 10% roztok (m/V) ve vodě.
4.2.1.18 Standardní roztoky
4.2.1.18.1 Kyselina thiglykolová (4.2.1.1), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
4.2.1.18.2 2,2'-dithiodi(octová kyselina) (4.2.1.2), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
4.2.1.18.3 Kyselina 2-merkaptopropionová (4.2.1.3), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
4.2.1.18.4 Kyselina 3-merkaptopropionová (4.2.1.4), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
4.2.1.18.5 3-merkaptopropan-1,2-diol (4.2.1.5), 0,4% roztok (m/V) ve vodě.
4.2.2 Přístroje a pomůcky
Obvyklé vybavení pro chromatografii na tenké vrstvě
4.2.3 Postup
4.2.3.1 Příprava vzorků
Vzorek se okyselí několika kapkami kyseliny chlorovodíkové (4.2.1.8) na pH 1 a v případě potřeby zfiltruje.
V některých případech může být účelné vzorek zředit. V tomto případě se okyselení kyselinou chlorovodíkovou provede před zředěním.
4.2.3.2 Vyvíjení
Na desku se nanese 1 μl roztoku vzorku (4.2.3.1) a 1 μl každého z pěti referenčních roztoků (4.2.1.18). Pečlivě se vysuší v mírném proudu dusíku a deska se vyvíjí rozpouštědly (4.2.1.16.1 nebo 4.2.1.16.2). Deska se usuší co nejrychleji pod dusíkem, aby nedošlo k oxidaci thiolů.
4.2.3.3 Detekce
Deska se postříká jedním ze tří činidel (4.2.1.17.1, 4.2.1.17.3 nebo 4.2.1.17.4). Pokud se deska postříká činidlem (4.2.1.17.3), vystaví se poté parám bromu (např. v nádobě obsahující malou kádinku činidla (4.2.1.17.2)), dokud se skvrny nezviditelní. Detekce postřikem činidlem (4.2.1.17.4) bude úspěšná jen tehdy, nepřekročí-li doba sušení desky 30 minut.
4.2.3.4 Interpretace
Hodnoty Rf a barvy referenčních roztoků se porovnají s roztoky vzorků. Průměrné hodnoty Rf uváděné dále jako hrubé vodítko slouží pouze pro srovnání. Závisí na:
— úrovni aktivace tenké vrstvy v době vyvíjení chromatogramu,
— teplotě ve vyvíjecí komoře.
Příklady hodnot Rf získaných na silikagelové vrstvě
| Vyvíjecí rozpouštědla | ||
| 4.2.1.16.1 | 4.2.1.16.2 | |
| Kyselina thioglykolová | 0,25 | 0,80 |
| Kyselina 2-merkaptopropionová | 0,40 | 0,95 |
| 2,2'-dithiodi(octová kyselina) | 0,00 | 0,35 |
| Kyselina 3-merkaptopropionová | 0,45 | 0,95 |
| 3-merkaptopropan-1,2-diol | 0,45 | 0,35 |