A. KVALITATIVNÍ STANOVENÍ

1. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ
Tato metoda je vhodná pro všechny kosmetické prostředky.

2. PRINCIP
Hexachlorofen ve vzorku se extrahuje ethylacetátem a kvalitativně se stanoví chromatografií na tenké vrstvě.

3. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE
Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší

3.1 Kyselina sírová, 4 mol/l

3.2 Celit AW

3.3 Ethylacetát

3.4 Mobilní fáze: Benzen obsahující 1 % (V/V) ledové kyseliny octové.

3.5 Detekční činidlo I:
Roztok rhodaminu B: Rozpustí se 100 mg rhodaminu B ve směsi 150 ml diethyletheru, 70 ml absolutního ethanolu a 16 ml vody.

3.6 Detekční činidlo II:
Roztok 2,6-dibrom-4-(chlorimino)cyklohexa-2,5-dienonu: 400 mg 2,6-dibrom-4-(chlorimino)cyklohexa-2,5-dienonu se rozpustí ve 100 ml methanolu (připravuje se čerstvý každý den).
Roztok uhličitanu sodného: 10 g uhličitanu sodného se rozpustí ve 100 ml demineralizované vody.

3.7 Standardní roztok:
Hexachlorofen, 0,05% roztok (m/V) v ethylacetátu

4. PŘÍSTROJE A POMŮCKY

4.1 TLC desky Kieselgel 254, 200 x 200 mm (nebo ekvivalentní)

4.2 Obvyklé vybavení pro TLC

4.3 Lázeň pro temperaci chromatografické komory udržovaná na teplotě 26 °C

5. PŘÍPRAVA ZKUŠEBNÍHO VZORKU

5.1 1 g homogenizovaného vzorku se důkladně promíchá s 1 g Celitu AW (3.2) a 1 ml kyseliny sírové (3.1).

5.2 Suší se 2 hodiny při 100 °C.

5.3 Nechá se vychladnout a vysušený zbytek se rozdrtí na jemný prášek.

5.4 Dvakrát se extrahuje vždy 10 ml ethylacetátu (3.3), po každé extrakci se odstředí a ethylacetátové vrstvy se sloučí.

5.5 Odpaří se při 60 °C.

5.6 Odparek se rozpustí ve 2 ml ethylacetátu (3.3).

6. POSTUP

6.1 2 μl roztoku zkušebního vzorku (5.6) a 2 μl standardního roztoku (3.7) se nanesou na desku pro chromatografii na tenké vrstvě (4.1).

6.2 Komora (4.3) se nasytí mobilní fází (3.4).

6.3 Deska pro chromatografii na tenké vrstvě se vloží do komory a vyvíjí se do vzdálenosti čela 150 mm.

6.4 Deska pro chromatografii na tenké vrstvě se vyjme z komory a suší se v sušárně s nuceným oběhem vzduchu při teplotě asi 105 °C.

6.5 Detekce
Skvrny hexachlorofenu na desce pro chromatografii na tenké vrstvě se detekují způsobem popsaným v bodě 6.5.1 nebo 6.5.2.

6.5.1 Deska se rovnoměrně postříká detekčním činidlem I (3.5). Po 30 minutách se deska pozoruje v UV světle při 254 nm.

6.5.2 Deska se rovnoměrně postříká roztokem 2,6-dibrom-4-(chlorimino)cyklohexa-2,5-dienonu detekčního činidla II (3.6). Následně se deska postříká roztokem uhličitanu sodného (3.6). Deska se po 10 minutách sušení při pokojové teplotě pozoruje v denním světle.

7. INTERPRETACE

7.1 Detekční činidlo I (3.5):
Hexachlorofen se detekuje jako namodralá skvrna na žluto-oranžovém fluoreskujícím pozadí a má Rf přibližně 0,5.

7.2 Detekční činidlo II (3.6):
Hexachlorofen se detekuje jako blankytně modrá až tyrkysově zbarvená skvrna na bílém pozadí a má Rf přibližně 0,5.