4. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE
Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší a musí být vhodná pro HPLC.

4.1 Methanol

4.2 Dihydrogenfosforečnan draselný (KH₂PO₄)

4.3 Octan zinečnatý (Zn(CH₃COO)₂·2H₂O)

4.4 Kyselina octová$(d_4^{20}=1,05)$

4.5 Hexakyanoželeznatan draselný (K₄(Fe(CN)₆)·3H₂O)

4.6 Ethyl-4-hydroxybenzoát

4.7 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoát

4.8 Ethyl-4-aminobenzoát

4.9 Fosfátový tlumivý roztok (0,02M): rozpustí se 2,72 g dihydrogenfosforečnanu draselného (4.2) v 1 litru vody.

4.10 Mobilní fáze: fosfátový tlumivý roztok (4.9)/methanol (4.1) 61/39 (V/V)
Složení mobilní fáze může být změněno s cílem dosáhnout faktoru rozlišení R ≥1,5.
$R=2\frac{d\text{'}{R}_2-d\text{'}{R}_1}{W_1+W_2}$
kde

R1 a R2=	retenční časy píků v min.,
W1 a W2 =	šířky píků v polovině výšky píků v mm,
d' =	rychlost posuvu papíru v mm/min..

4.11 Zásobní roztok 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátu: Naváží se asi 40 mg 2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoátu přesně a převede se do odměrné baňky na 100 ml. Rozpustí se ve 40 ml methanolu (4.1). Doplní se tlumivým roztokem (4.9) po rysku a promíchá se.

4.12 Zásobní roztok ethyl-4-aminobenzoátu: Naváží se asi 40 mg ethyl-4-aminobenzoátu přesně a převede se do odměrné baňky na 100 ml. Rozpustí se ve 40 ml methanolu (4.1). Doplní se tlumivým roztokem (4.9) po rysku a promíchá se.

4.13 Roztok vnitřního standardu: Naváží se asi 50 mg ethyl-4-hydroxybenzoátu přesně a převede se do odměrné baňky na 100 ml. Rozpustí se ve 40 ml methanolu (4.1). Doplní se tlumivým roztokem (4.9) po rysku a promíchá se.

4.14 Standardní roztoky: Připraví se čtyři standardní roztoky rozpuštěním následujících látek ve 100 ml mobilní fáze (4.10) podle následující tabulky:

Standardní roztok	2,3-dihydroxypropyl-4-aminobenzoát		ethyl-4-aminobenzoát		ethyl-4-hydroxybenzoát
	(μg/ml) (*)	ml (4.11)	(μg/ml) (*)	ml (4.12)	(μg/ml) (*)	ml (4.13)
I	8	2	8	2	50	10
II	16	4	12	3	50	10
III	24	6	16	4	50	10
IV	40	10	20	5	50	10
(*) Tyto hodnoty jsou informativní a odpovídají přesným hmotnostem v 4.11, 4.12 a 4.13.
Poznámka: Tyto roztoky mohou být připraveny jiným způsobem.

4.15 Carrezovo činidlo I: Rozpustí se 26,5 g hexakyanoželeznatanu draselného (4.5) ve vodě a doplní se do 250 ml.

4.16 Carrezovo činidlo II: Rozpustí se 54,9 g octanu zinečnatého (4.3) a 7,5 ml kyseliny octové (4.4) ve vodě a doplní se do 250 ml.

4.17 Merck Lichrosorb RP-18, nebo ekvivalentní, s průměrnou velikostí částic 5 μm