A. KVALITATIVNÍ STANOVENÍ
1. ROZSAH A OBLAST POUŽITÍ
Tato metoda je určená ke kvalitativnímu stanovení přítomnosti chininu v šamponech a vlasových lotionech.
2. PRINCIP
Kvalitativní stanovení se provádí chromatografií na tenké vrstvě silikagelu. Důkazem chininu je modrá fluorescence v kyselém prostředí při 360 nm.
Pro další potvrzení lze fluorescenci odstranit parami bromu a páry čpavku vyvolají žlutou fluorescenci.
3. POUŽITÉ CHEMIKÁLIE
Všechny použité chemikálie musí být čistoty p.a. nebo vyšší
3.1 Silikagelové desky bez fluorescenčního indikátoru, o tloušťce vrstvy 0,25 mm, 200 mm x 200 mm
3.2 Mobilní fáze: toluen/diethylether/dichlormethan/diethylamin 20/20/20/8 (V/V/V/V)
3.3 Methanol
3.4 Kyselina sírová (96%;
3.5 Diethylether
3.6 Detekční činidlo: k 95 ml diethyletheru (3.5) se v chlazené nádobě opatrně přidá 5 ml kyseliny sírové (3.4).
3.7 Brom
3.8 Vodný roztok amoniaku (28 %;
3.9 Chinin bezvodý
3.10 Standardní roztok: do odměrné baňky se naváží přesně asi 100,0 mg bezvodého chininu (3.9) a rozpustí se ve 100 ml methanolu (3.3).
4. PŘÍSTROJE A POMŮCKY
4.1 Obvyklé vybavení pro chromatografii na tenké vrstvě
4.2 Ultrazvuková lázeň
4.3 Filtr Millipore FH 0,5 μm nebo ekvivalentní a vhodné filtrační zařízení
5. POSTUP
5.1 Příprava vzorku
Do odměrné baňky na 100 ml se přesně naváží množství vzorku, které obsahuje asi 100 mg chininu, rozpustí se a doplní po rysku methanolem (3.3).
Baňka se uzavře a ponechá jednu hodinu při laboratorní teplotě v ultrazvukové lázni (4.2). Obsah se zfiltruje (4.3) a filtrát se použije pro chromatografii.
5.2 Chromatografie na tenké vrstvě
Na desku (3.1) se nanese 1,0 μl standardního roztoku (3.10) a 1,0 μl roztoku vzorku (5.1). Chromatogram se vyvíjí do výšky 150 mm v komoře předem nasycené rozpouštědlem (3.2).
5.3 Detekce
5.3.1 Deska se vysuší při pokojové teplotě.
5.3.2 Postříká se činidlem 3.6.
5.3.3 Deska se nechá jednu hodinu schnout při laboratorní teplotě.
5.3.4 Pozoruje se ve světle UV lampy nastavené na vlnovou délku 360 nm. Chinin se projeví jako intenzivně fluoreskující modrá skvrna.
Jako příklad jsou v následující tabulce uvedeny hodnoty Rf hlavních chininových alkaloidů při vyvíjení chromatogramu rozpouštědlem 3.2:
| Alkaloid | Rf |
| Chinin | 0,20 |
| Chinidin | 0,29 |
| Cinchonin | 0,33 |
| Cinchonidin | 0,27 |
| Hydrochinidin | 0,17 |
5.3.5 Pro další potvrzení přítomnosti chininu se deska vystaví asi na jednu hodinu parám bromu (3.7). Fluorescence zmizí. Je-li tatáž deska vystavena parám amoniaku (3.8), skvrny se znovu objeví v hnědé barvě a pod světlem UV lampy (360 nm) je pozorovatelná nažloutlá fluorescence. Mez detekce: 0,1 μg chininu.