3. Chemoterapeutika
3.1. Stanovení obsahu dimetridazolu
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu dimetridazolu v krmivech a premixech.
Obsah dimetridazolu se stanoví po extrakci vzorku 90 % methylalkoholem a přečištění chromatografií na pevné fázi na alumině B metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 309 nm.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:
| od 3,0 do 30 mg/kg | 15 % relat. |
| od 30 do 100 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 100 mg/kg | 5 % relat. |
Uvedené hodnoty opakovatelnosti se nevztahují pro určení pracovní přesnosti míchacího zařízení podle přílohy č. 16.
Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:
| od 3,0 do 25 mg/kg | 20 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| nad 50 mg/kg | 10 % relat. |
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 3,0 mg/kg.
4.1. Stanovení obsahu vitaminu A a vitaminu E
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A a vitaminu E v krmivech a premixech.
Obsah vitaminu A a E se stanoví po alkalické hydrolýze hydroxidem draselným a následné extrakci na pevné fázi po převedení do cyklohexanu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) na normální fázi s UV detekcí při 325 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 325 nm, emisní vlnová délka 480 nm) pro vitamin A a UV detekce při 292 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 292 nm, emisní vlnová délka 330 nm) pro vitamin E.
Výsledky se vyjadřují pro obsah vitaminu A:
| do 999 m.j./kg | s přesností na 1 m.j./kg |
| do 1000 do 9999 m.j./kg | s přesností na 10 m.j./kg |
| od 10000 do 99999 m.j./kg | s přesností na 100 m.j./kg |
| od 100000do 999999 m.j./kg | s přesností na 1000 m.j./kg |
| nad 1000000 m.j./kg | s přesností na 10000m.j./kg |
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu A (UV detekce):
| od 1000 do 50000 m.j./kg | 20 % relat. |
| od 50000 do 100000 m.j./kg | 10000 m.j./kg |
| nad 100000 m.j./kg | 10 % relat. |
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
| od 0,8 do 50 mg/kg | 20 % relat. |
| od 50 do 100 mg/kg | 10 mg/kg |
| nad 100 mg/kg | 10 % relat. |
Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu A (UV detekce):
| od 1000 do 4000 m.j./kg | 1000 m.j./kg |
| od 4000 do 100000 m.j./kg | 25 % relat. |
| od 100000 do 125000 m.j./kg | 25000 m.j./kg |
| od 125000 do 375000 m.j./kg | 20 % relat. |
| od 375000 do 600000 m.j./kg | 75000 m.j./kg |
| od 600000 do 800000 m.j./kg | 12,5 % relat. |
| od 800000 do 1000000 m.j./kg | 100000 m.j./kg |
| nad 1000000 m.j./kg | 10 % relat. |
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
| od 0,8 do 25 mg/kg | 40 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 10 mg/kg |
| od 50 do 150 mg/kg | 20 % relat. |
| od 150 do 200 mg/kg | 30 mg/kg |
| od 200 do 500 mg/kg | 15 % relat. |
| od 500 do 750 mg/kg | 75 mg/kg |
| nad 750 mg/kg | 10 % relat. |
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti pro vitamin A je 250 m.j./kg pro fluorescenční detekci, pro UV detekci 1000 m.j./kg. Mez stanovitelnosti pro vitamin E je 0,1 mg/kg pro fluorescenční detekci, pro UV detekci 0,8 mg/kg.
3.2. Stanovení obsahu dimetridazolu
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu dimetridazolu v krmivech.
Obsah dimetridazolu se stanoví po extrakci vzorku methanolem a přečištění na alumině spektrofotometricky.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu dimetridazolu:
| do 4,0 mg/kg | 50 % relat. |
| od 4,0 do 10 mg/kg | 2 mg/kg |
| od 10 do 25 mg/kg | 20 % relat |
| od 25 do 50 mg/kg | 5 mg/kg |
| od 50 do 5000 mg/kg | 10 % relat. |
| od 5000 do 10000 mg/kg | 500 mg/kg |
| nad 10 000 mg/kg | 5 % relat. |
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
4.2. Stanovení obsahu vitaminu A a vitaminu E
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A a vitaminu E v krmivech a premixech.
Obsah vitaminu A a E se stanoví po alkalické hydrolýze hydroxidem draselným a následné extrakci hexanem a převedením do methylalkoholu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 325 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 325 nm, emisní vlnová délka 480 nm) pro vitamin A a UV detekce při 292 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 292 nm, emisní vlnová délka 330 nm) pro vitamin E.
Výsledky se vyjadřují pro obsah vitaminu A
| do 999 m.j./kg | s přesností na 1 m.j./kg |
| do 1000 do 9999 m.j./kg | s přesností na 10 m.j./kg |
| od 10000 do 99999 m.j./kg | s přesností na 100 m.j./kg |
| od 100000do 999999 m.j./kg | s přesností na 1000 m.j./kg |
| nad 1000000 m.j./kg | s přesností na 10000 m.j./kg |
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu A (UV detekce):
| od 1000 do 8000 m.j./kg | 25 % relat. |
| od 8000 do 13500 m.j./kg | 2000 m.j./kg |
| od 13500 do 40000 m.j./kg | 15 % relat. |
| od 40000 do 300000 m.j./kg | 37500 m.j./kg |
| od 300000 do 1600000 m.j./kg | 12,5 % relat. |
| od 1600000 do 2600000 m.j./kg | 200000 m.j./kg |
| od 2600000 do 4000000 m.j./kg | 7,5 % relat. |
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
| od 0.8 do 55 mg/kg | 10 % relat. |
| od 55 do 100 mg/kg | 5,5 mg/kg |
| od 100 do 250 mg/kg | 5,5 % relat. |
| od 500 do 1000 mg/kg | 45 mg/kg |
| od 1000 do 5000 mg/kg | 4,5 % relat. |
| od 5000 do 7500 mg/kg | 225 mg/kg |
| více než 7500 mg/kg | 3 % relat. |
Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu A (UV detekce):
| od 1000 do 100000 m.j./kg | 25 % relat. |
| od 100000 do 125000 m.j./kg | 25000 m.j./kg |
| od 125000 do 375000 m.j./kg | 20 % relat. |
| od 375000 do 600000 m.j./kg | 75000 m.j./kg |
| od 600000 do 800000 m.j./kg | 12,5 % relat. |
| od 800000 do 1000000 m.j./kg | 100000 m.j./kg |
| nad 1000000 m.j./kg | 10 % relat. |
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
| od 0,8 mg/kg do 25 mg/kg | 40 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 10 mg/kg |
| od 50 do 150 mg/kg | 20 % relat. |
| od 150 do 200 mg/kg | 30 mg/kg |
| od 200 do 500 mg/kg | 15 % relat. |
| od 500 do 750 mg/kg | 75 mg/kg |
| nad 750 mg/ kg | 10 % relat. |
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti pro vitamin A je 250 m.j./kg pro fluorescenční detekci, pro UV detekci 1000 m.j./kg. Mez stanovitelnosti pro vitamin E je 0,1 mg/kg pro fluorescenční detekci, pro UV detekci 0,8 mg/kg.
4.3. Stanovení obsahu vitaminu E
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu E v krmivech a premixech.
Obsah vitaminu E se stanoví po alkalické hydrolýze hydroxidem draselným a následné extrakci na pevné fázi po převedení do cyklohexanu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) na normální fázi s UV detekcí při 292 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 295 nm, emisní vlnová délka 330 nm).
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
| od 0,8 do 50 mg/kg | 20 % relat. |
| od 50 do 100 mg/kg | 10 mg/kg |
| nad 100 mg/kg | 10 % relat. |
Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
| od 0,8 do 25 mg/kg | 40 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 10 mg/kg |
| od 50 do 150 mg/kg | 20 % relat. |
| od 150 do 200 mg/kg | 30 mg/kg |
| od 200 do 500 mg/kg | 15 % relat. |
| od 500 do 750 mg/kg | 75 mg/kg |
| nad 750 mg/kg | 10 % relat. |
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je pro UV detekci 0,8 mg/kg, pro fluorescenční detekci 0,1 mg/kg.
4. Vitaminy
4.4. Stanovení obsahu přidaného vitaminu E
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu E v premixech a v krmných směsích.
Obsah přidaného vitaminu E (octan tokoferolu) se stanoví plynovou chromatografií po extrakci vzorku diethyletherem resp. hexanem přímo, resp. po přečištění na sloupci oxidu hlinitého.
Opakovatelnost
Pro premixy: Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí při obsahu vitaminu E 1 500 000 mg/kg překročit hodnotu 88000 mg/kg.
Pro krmné směsi: Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí při obsahu vitaminu E 20 mg/kg překročit hodnotu 2,15 mg/kg.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
4.5. Stanovení obsahu vitaminu E
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu E v krmivech a premixech.
Obsah vitaminu E se stanoví po alkalické hydrolýze hydroxidem draselným a následné extrakci hexanem a převedením do methylalkoholu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 292 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 295 nm, emisní vlnová délka 330 nm).
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
| od 0,8 do 55 mg/kg | 10 % relat. |
| od 55 do 100 mg/kg | 5,5 mg/kg |
| od 100 do 250 mg/kg | 5,5 % relat. |
| od 500 do 1000 mg/kg | 45 mg/kg |
| od 1000 do 5000 mg/kg | 4,5 % relat. |
| od 5000 do 7500 mg/kg | 225 mg/kg |
| více než 7500 mg/kg | 3 % relat. |
Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):
| od 0,8 do 25 mg/kg | 40 % relat. |
| od 25 do 50 mg/kg | 10 mg/kg |
| od 50 do 150 mg/kg | 20 % relat. |
| od 150 do 200 mg/kg | 30 mg/kg |
| od 200 do 500 mg/kg | 15 % relat. |
| od 500 do 750 mg/kg | 75 mg/kg |
| nad 750 mg/kg | 10 % relat. |
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je pro UV detekci 0,8 mg/kg, pro fluorescenční detekci 0,1 mg/kg.
4.6. Stanovení obsahu cholinu
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu cholinu v krmivech a premixech.
Obsah cholinu se stanoví po hydrolýze vzorku hydroxidem barnatým a přečištění hydrolyzátu na ionexu na základě vzniku komplexu s reineckátem amonným v prostředí roztoku fosforečnanu sodného spektrofotometricky po rozpuštění komplexu v acetonu při vlnové délce 525 nm.
Opakovatelnost
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 20 mg/kg.
4.7. Stanovení obsahu pantothenanu vápenatého
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu pantothenanu vápenatého v premixech.
Obsah pantothenanu vápenatého se stanoví na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu Saccharomyces carlsbergensis CCM 4288 (ATCC 9080) difúzním plotnovým postupem.
Opakovatelnost
Nestanovena
Reprodukovatelnost
Nestanovena..
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
4.8. Stanovení vitaminů B1, B2, B6
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminů B1, B2 a B6 v krmných směsích.
Vitaminy B1 (thiamin), B2 (riboflavin) a B6 (pyridoxin) se extrahují ze vzorku krmiva vodou a po hydrolýze kyselinou chloristou se stanoví postupem vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) s využitím iontových párů na reverzní fázi. Detekce vitaminu B2 a B6 se provádí přímo fluorimetricky, zatímco vitamin B1 se před detekcí nejprve oxiduje derivatizačním činidlem v reakční smyčce postkolonové derivatizace.
Opakovatelnost
Nestanovena
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
4.9. Stanovení obsahu vitaminu B2
Účel, rozsah a princip
Používají se dva postupy stanovení obsahu vitaminu B<SUB>2</SUB> v premixech - postup fluorimetrický a postup difúzní plotnový.
Obsah vitamin B2 se stanoví fluorimetricky v mírně okyseleném prostředí na základě fluorescence při vlnové délce 440 nm nebo difúzním plotnovým postupem na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu Lactobacillus rhamnosus CCM 1825 (ATCC 7469).
Opakovatelnost
Pro metodu fluorometrickou nestanovena.
Pro metodu difuzní plotnovou:
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí při obsahu vitaminu B2 500000 mg/kg překročit hodnotu 40500 mg/kg.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Nestanovena.
4.10. Stanovení obsahu vitaminu B6
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu B6 v premixech.
Vitamin B6 ve všech jeho formách se stanoví na základě stimulačního účinku na růst testovacího mikroorganismu kvasinky Saccharomyces carlsbergensis CCM 4228 (ATCC 9080) difúzním plotnovým způsobem.
Opakovatelnost
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
4.11. Stanovení obsahu vitaminu K3
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu K3 v krmivech a premixech. Obsah vitaminu K3 se stanoví po extrakci vzorku chloroformem, následné hydrolýze amoniakem, metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) na normální fázi s UV detekcí při 264 nm.
Opakovatelnost
Nestanovena.
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 2,9 mg/kg.
4.12. Stanovení obsahu vitaminu K3
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu K3 v premixech a krmných směsích. Mez stanovitelnosti je 1,0 mg/kg.
Po extrakci vzorku ethylalkoholem se stanoví obsah vitaminu K3 spektrofotometricky při vlnové délce 635 nm.
Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu K3:
| do 10 mg/kg | 20 % relat. |
| od 10 do 14 mg/kg | 2 mg/kg |
| od 14 do 100 mg/kg | 15 % relat. |
| od 100 do 150 mg/kg | 15 mg/kg |
| nad 150 mg/kg | 10 % relat. |
Reprodukovatelnost
Nestanovena.
Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti je 1.0 mg/kg.