4.2. Stanovení obsahu vitaminu A a vitaminu E
Účel, rozsah a princip
Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu vitaminu A a vitaminu E v krmivech a premixech.
Obsah vitaminu A a E se stanoví po alkalické hydrolýze hydroxidem draselným a následné extrakci hexanem a převedením do methylalkoholu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) na reverzní fázi s UV detekcí při 325 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 325 nm, emisní vlnová délka 480 nm) pro vitamin A a UV detekce při 292 nm nebo fluorescenční detekcí (excitační vlnová délka 292 nm, emisní vlnová délka 330 nm) pro vitamin E.
Výsledky se vyjadřují pro obsah vitaminu A

do 999 m.j./kg	s přesností na 1 m.j./kg
do 1000 do 9999 m.j./kg	s přesností na 10 m.j./kg
od 10000 do 99999 m.j./kg	s přesností na 100 m.j./kg
od 100000do 999999 m.j./kg	s přesností na 1000 m.j./kg
nad 1000000 m.j./kg	s přesností na 10000 m.j./kg

Opakovatelnost
Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu A (UV detekce):

od 1000 do 8000 m.j./kg	25 % relat.
od 8000 do 13500 m.j./kg	2000 m.j./kg
od 13500 do 40000 m.j./kg	15 % relat.
od 40000 do 300000 m.j./kg	37500 m.j./kg
od 300000 do 1600000 m.j./kg	12,5 % relat.
od 1600000 do 2600000 m.j./kg	200000 m.j./kg
od 2600000 do 4000000 m.j./kg	7,5 % relat.

Rozdíl mezi dvěma paralelními stanoveními prováděnými na stejném vzorku nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):

od 0.8 do 55 mg/kg	10 % relat.
od 55 do 100 mg/kg	5,5 mg/kg
od 100 do 250 mg/kg	5,5 % relat.
od 500 do 1000 mg/kg	45 mg/kg
od 1000 do 5000 mg/kg	4,5 % relat.
od 5000 do 7500 mg/kg	225 mg/kg
více než 7500 mg/kg	3 % relat.

Reprodukovatelnost
Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu A (UV detekce):

od 1000 do 100000 m.j./kg	25 % relat.
od 100000 do 125000 m.j./kg	25000 m.j./kg
od 125000 do 375000 m.j./kg	20 % relat.
od 375000 do 600000 m.j./kg	75000 m.j./kg
od 600000 do 800000 m.j./kg	12,5 % relat.
od 800000 do 1000000 m.j./kg	100000 m.j./kg
nad 1000000 m.j./kg	10 % relat.

Rozdíl mezi dvěma výsledky zkoušek stejného vzorku prováděnými ve dvou laboratořích nesmí překročit při obsahu vitaminu E (UV detekce):

od 0,8 mg/kg do 25 mg/kg	40 % relat.
od 25 do 50 mg/kg	10 mg/kg
od 50 do 150 mg/kg	20 % relat.
od 150 do 200 mg/kg	30 mg/kg
od 200 do 500 mg/kg	15 % relat.
od 500 do 750 mg/kg	75 mg/kg
nad 750 mg/ kg	10 % relat.

Mez stanovitelnosti
Mez stanovitelnosti pro vitamin A je 250 m.j./kg pro fluorescenční detekci, pro UV detekci 1000 m.j./kg. Mez stanovitelnosti pro vitamin E je 0,1 mg/kg pro fluorescenční detekci, pro UV detekci 0,8 mg/kg.