b) Následně musí být určeny hladiny, které mají vážné krátkodobé nežádoucí účinky pro různé trofické hladiny v daném životním prostředí (půda, voda). Tyto testy musí být v souladu s pokynem OECD⁶) nebo s analogickými osvědčenými pokyny. Žádoucí testy pro suchozemské prostředí zahrnují: toxicitu pro dešťovky (létální dávka 50% LD₅₀) fytotoxicitu (účinná koncentrace 50%, ÚK₅₀ ) pro suchozemské rostliny, účinky na půdní mikroorganismy (například: ÚK₅₀ pro účinky na metagenezi a vazbu dusíku).
Pro vodní prostředí: ryby, studie LD₅₀ 96 hodin; Daphnia magna, studie LD₅₀ za 48 hodin; řasy, studie ÚK₅₀ a studie toxicity pro sedimentační organismy.