A. Postupy získávání, posuzování a zpracování spermatu, uchovávání a výdeje inseminačních dávek
1. Odběr spermatu
1.1. Odběr spermatu se provádí při vzeskoku hřebce na fantom nebo na klisnu pomocí umělé vagíny různého typu, přičemž se získává celý ejakulát nebo jeho frakce.
1.2. Odběr spermatu se provádí způsobem, který v nejvyšší míře zamezuje možnosti mikrobiální kontaminace odebraného spermatu.
1.3. Všechny pomůcky, které jsou v přímém kontaktu se spermatem, musí být sterilní, vnitřní vložky umělých vagín musí být sterilizovány v autoklávu nebo zhotoveny z materiálu pro jednorázové použití.
2. Hodnocení spermatu
Hodnocení spermatu se provádí u každého ejakulátu nebo jeho frakce.
| Hodnotí se: | způsob hodnocení: |
|---|---|
| aktivita spermií | mikroskopicky subjektivním odhadem při zvětšení 1 : 200 až 300 a teplotě 38 až 40 oC, vyjadřuje se procentem pohyblivých spermií |
| hustota spermatu | fotokolorimetricky nebo počítáním v Bürkerově komůrce, vyjadřuje se počtem spermií v 1 mm3 spermatu |
| množství spermatu | měřením objemu v odměrném válci v ml nebo vážením a přepočtem na cm3 |
| výskyt abnormálních spermií | nejméně každých 30 dní vyhodnocením obarveného preparátu |
| mikrobiologický obraz | kvalitativní a kvantitativní mikrobiologické vyšetření odebraného nativního spermatu, před zařazením do inseminace a nejméně jednou za 6 měsíců |
3. Zpracování spermatu
3.1. Zpracování spermatu se provádí způsobem vylučujícím jeho dodatečnou mikrobiální kontaminaci a poškození. Sperma před zpracováním splňuje kvalitativní ukazatele:
| sperma pro krátkodobou konzervaci | a) obsahuje nejméně 50 % aktivních spermií, b) hustota je nejméně 100 000 spermií v 1 mm3, c) objem je nejméně 10 cm3, d) obsahuje 60 % morfologicky normálních spermií při posledním hodnocení, e) neobsahuje patogenní mikroorganizmy a plísně. |
| sperma pro dlouhodobou konzervaci | a) obsahuje nejméně 70 % aktivních spermií, b) hustota je nejméně 120 000 spermií v 1 mm3, c) objem je nejméně 10 cm3, d) obsahuje nejméně 70 % morfologicky normálních spermií při posledním hodnocení, e) neobsahuje patogenní mikroorganizmy a plísně. |
3.2. Způsob ředění a konzervace:
| krátkodobě konzervované sperma | zdravotně nezávadným ředidlem s přídavkem antibiotik technologickým postupem podle pokynů výrobce použitého ředidla. |
| dlouhodobě konzervované sperma | zdravotně nezávadným ředidlem s přídavkem kryoprotektiv a antibiotik technologickým postupem podle pokynů výrobce použitého ředidla; zředěné sperma rozdělené do inseminačních dávek se zmrazuje v programovatelném zmrazovači nebo v jiném zařízení zajišťujícím kontrolovaný a standardní průběh poklesu teploty zmrazovaného spermatu |
Poznámka:
Způsob zpracování spermatu do pejet znemožňuje dodatečnou kontaminaci spermatu během jeho uchovávání.
4. Výdej a přeprava inseminačních dávek
4.1. Inseminační dávky krátkodobě konzervovaného spermatu se vydávají a přepravují ve speciálních přepravnících, které zajišťují udržení požadované teploty po dobu přepravy.
4.2. Inseminační dávky dlouhodobě konzervovaného spermatu se uchovávají ponořené v tekutém dusíku v kontejnerech, které jsou před každým novým naplněním dusíkem náležitě dezinfikovány.