A. Postupy získávání, posuzování, a zpracování spermatu, uchovávání a výdeje inseminačních dávek

1. Odběr spermatu

1.1. Odběr spermatu u beranů a kozlů se provádí po očištění plemeníka a omytí a osušení předkožky, pomocí umělé vagíny, vyjmuté z termostatu o teplotě 41 až 43 °C, s frekvencí odběru v době připouštěcí sezóny u starších beranů 4 a vícekrát týdně, u mladších 2 až 3 krát týdně, u kozlů starších jednoho roku 4 a vícekrát týdně, u mladších s nižší frekvencí podle kondice.

1.2. Po odběru je sběrač s čerstvým spermatem, označený značkou a číslem státního registru plemeníka, oddělen a předán do laboratoře k hodnocení kvality.

1.3. Vzorky k mikroskopickému posouzení jsou získávány sterilními pomůckami do 10 minut po odběru.

2. Hodnocení spermatu
Hodnocení spermatu se provádí posouzením jednotlivých vlastností spermatu podle charakteristických znaků a projevů metabolizmu při pokojové teplotě 20 až 25 °C.

Hodnocení:	hodnotí se:		způsob hodnocení:
čerstvé sperma	zdravotní nezávadnost spermatu		nejméně jednou za půl roku veterinárním vyšetřením
	objem		měřením nebo vážením s přesností na 0,1 cm3 (0,1 g)
	barva, konzistence, pach a obsah přimísenin		smyslovým posouzením
	hustota spermatu		fotometricky u každého ejakulátu (kontrolní propočty, případně kalibrace přístrojů se provádějí v Bürkerově komůrce)
	aktivita spermatu		mikroskopicky u každého ejakulátu při zvětšení 1: 200 až 300 a při teplotě 39 ± 1°C, kdy se zjišťuje odhadem procentické zastoupení spermií pohybujících se vpřed za hlavičkou
	výskyt abnormálních spermií		mikroskopicky při zvětšení 1 : 1000 až 1500 a vyjadřuje se v %, u provozních beranů a kozlů nejméně jednou za měsíc
krátkodobě uchovávané sperma	aktivita spermatu*)		jako u čerstvého spermatu
	počet aktivních spermií v inseminační dávce		v 10 čtvercích v Bürkerově komůrce tak, že průměrný počet spermií ve čtverci se přepočte na velikost inseminační dávky a vynásobením počtu všech spermií procentem aktivity se zjistí počet aktivních spermií v inseminační dávce,
	přežitelnost		tepelným testem
			1. u beraního spermatu tak, že 0,1 cm3 ředěného spermatu ve zkumavce se vloží do vodní lázně o teplotě 45 ± 1 °C, za 30 minut se ke spermatu přidá 1 cm3 citronanu sodného zahřátého na teplotu 39 ± 1 °C a aktivita se posoudí jako u čerstvého spermatu,
			2. u kozlího spermatu tak, že 0,1 cm3 ředěného spermatu se ve zkumavce s 1 cm3 fyziologického roztoku NaCl inkubuje ve vodní lázni o teplotě 47,5 °C po dobu 10 minut a po této době se hodnotí aktivita jako u čerstvého spermatu
dlouhodobě uchovávané sperma**)	aktivita spermií**)	peleta beraního spermatu	vloží se do malé zkumavky předehřáté asi na 40 °C a ve vodní lázni se rozmrazí „na sucho“, poté se přidá 1,0 cm3 citronanu sodného o teplotě 39 ± 1 °C a aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu,
		peleta kozlího spermatu	rozmrazí se v 1,0 cm3 citronanu sodného o teplotě 39 ± 1 °C a aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu,
		pejeta	rozmrazí se ve vodní lázni o teplotě 39 ± 1 °C, její obsah se promíchá a vypustí do zkumavky s roztokem citronanu sodného a aktivita spermií se posuzuje jako u čerstvého spermatu,
	počet aktivních spermií		jako u krátkodobě uchovávaného spermatu
	přežitelnost rozmrazeného beraního spermatu		tepelným testem tak, že se peleta rozmrazí „na sucho“ ve zkumavce ve vodní lázni o teplotě 45 ± 1 °C po dobu 30 minut, poté se přidá k rozmrazené peletě 1,0 cm3 roztoku citronanu sodného o teplotě 45 ± 1 °C a poté se aktivita hodnotí jako u čerstvého spermatu

Poznámky:
*) u každého naředěného ejakulátu se vzorky odebírají sterilně a vyšetřují se bezprostředně po přípravě
**) vzorky se odebírají sterilně a vyšetřují se bezprostředně po rozmrazení
***) u každého ejakulátu na pracovišti, kde bylo sperma zmraženo a u každého ejakulátu před expedicí

3. Zpracování spermatu

3.1. Ke zpracování spermatu se používají ejakuláty, které odpovídají požadavkům uvedeným v bodě B.

3.2. Veškeré předměty přicházející do styku se spermatem musí být sterilní.

3.3. Produkty živočišného původu používané při ošetření spermatu jsou zdravotně nezávadné.

3.4. Sperma se ředí při laboratorní teplotě 20 až 25 °C, k ředění se používají pouze média, která po konzervaci uchovávají dobrou oplozovací schopnost spermatu a jeho zdravotní nezávadnost a ředí se technologickým postupem podle pokynů výrobce ředidla.,

3.5. Do spermatu se přidávají antibiotika v účinné koncentraci

4. Uchovávání a ředění spermatu

Krátkodobě uchovávané sperma	beraní sperma	při teplotě 16 až 22 °C při ředění homogenizovaným mlékem
	kozlí sperma	při teplotě 1až 3 °C při ředění žloutkocitronanovým ředidlem
Dlouhodobě uchovávané sperma	při teplotě –196 °C v tekutém dusíku, který nebyl použit pro jiné produkty živočišného původu

5. Výdej inseminačních dávek

Inseminační dávky s krátkodobým použitím	vydávají se podle podmínek daných technologickým postupem;
	ředěné beraní sperma	vydává se v termoboxu s takovým množstvím ledu, aby teplota byla v rozmezí 16 až 22 °C,
	ředěné kozlí sperma	vydává se v termoboxu s takovým množstvím ledu, aby teplota byla v rozmezí 1 až 3 °C
Zmrazené inseminační dávky	vydávají se v kontejnerech v tekutém dusíku, které jsou uvnitř uzpůsobeny použité technologii zmrazování v peletách nebo pejetách a náležitě desinfikovány před každým naplněním tekutým dusíkem, který nebyl použit pro jiné produkty živočišného původu, přičemž interval desinfekce je dán typem a používáním kontejneru