3 PROJEKT POKUSU, PROTOKOL POKUSU A ZÁVĚREČNÁ ZPRÁVA
V souladu s příslušnými právními předpisy9),10) musí být zpracován projekt pokusu a o průběhu pokusu je nutno vést protokol.
Závěry.
Tabulka 12:
Minimální počet pokusných zvířat na skupinu, provádí-li se studie neurotoxicity samostatně nebo v kombinaci s dalšími studiemi
| TYP PROVEDENÉ STUDIE NEUROTOXICITY: | ||||
|---|---|---|---|---|
| Samostatná studie | Kombinovaná studie s 28 denní studií | Kombinovaná studie s 90 denní studií | Kombinovaná studie se studií chronické toxicity | |
| Počet pokusných zvířat na skupinu | 10 samců a 10 samic | 10 samců a 10 samic | 15 samců a 15 samic | 25 samců a 25 samic |
| Počet pokusných zvířat vybraných k funkčnímu testování, včetně podrobných klinických pozorování | 10 samců a 10 samic | 10 samců a 10 samic | 10 samců a 10 samic | 10 samců a 10 samic |
| Počet pokusných zvířat vybraných k perfuzi in situ a neurohistopatologickému vyšetření | 5 samců a 5 samic | 5 samců a 5 samic | 5 samců a 5 samic | 5 samců a 5 samic |
| Počet pokusných zvířat vybraných k pozorování toxicity po opakované dávce subchronické/chronické, k hematologickému vyšetření, klinickému biochemickému vyšetření, k histopatologickému vyšetření atd., jak je uvedeno v příslušných Doporučeních | 5 samců a 5 samic | 10 samců† a 10 samic† | 20 samců† a 20 samic† | |
| Případná doplňující pozorování | 5 samců a 5 samic | |||
| † Zahrnuto je pět pokusných zvířat vybraných k funkčnímu testování a podrobnému klinickému pozorování jako součást studie neurotoxicity. | ||||
Tabulka 13:
Četnost klinických pozorování a funkčních testů
| Typ pozorování | Délka studie | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| akutní | 28 denní | 90 denní | chronická | ||
| U všech pokusných zvířat | Celkový zdravotní stav | Denně | Denně | Denně | Denně |
| Mortalita/morbidita | Dvakrát denně | Dvakrát denně | Dvakrát denně | Dvakrát denně | |
| U všech pokusných zvířat vybraných k funkčním pozorováním | Podrobná klinická pozorování | - před první expozicí - v průběhu 8 h po podání dávky v době odhadovaného nejvyššího účinku - 7. a 14. den po skončení dávkování | - před první expozicí - poté jednou týdně | - před první expozicí - jednou během prvního nebo druhého týdne expozice - poté měsíčně | - před první expozicí - jednou na konci prvního měsíce expozice - poté každé tři měsíce |
| Funkční testy | - před první expozicí - v průběhu 8 h po podání dávky v době odhadovaného nejvyššího účinku - 7. a 14. den po skončení dávkování | - před první expozicí - během čtvrtého týdne aplikace co nejblíže ke konci období expozice | - před první expozicí - jednou během prvního nebo druhého týdne expozice - poté měsíčně | - před první expozicí - jednou na konci prvního měsíce expozice - poté každé tři měsíce | |
3.1 Zpráva o průběhu pokusu obsahuje tyto informace:
Zkoušená látka:
— fyzikální vlastnosti (včetně isomerie, čistoty a fyzikálně-chemických vlastností),
— údaje o identitě.
Vehikulum (pokud bylo použito):
— zdůvodnění volby vehikula.
Pokusná zvířata:
— použité druhy a kmen,
— počet, stáří a pohlaví pokusných zvířat,
— původ, podmínky chovu, aklimatizace, krmivo atd.,
— hmotnost jednotlivých pokusných zvířat na začátku zkoušky.
Zkušební podmínky:
— podrobnosti o úpravě směsi zkoušené látky či přípravě krmiva, dosažené koncentraci, stabilitě a homogenitě přípravku,
— specifikace aplikovaných dávek, včetně podrobností o vehikulu, objemu a fyzikální formě aplikovaného materiálu,
— podrobnosti o způsobu aplikace zkoušené látky,
— zdůvodnění výběru úrovní dávek,
— zdůvodnění způsobu aplikace a trvání expozice,
— přepočet koncentrace zkoušené látky v krmivu nebo pitné vodě (ppm) na skutečnou denní dávku v mg/kg tělesné hmotnosti,
— podrobnosti o krmivu a kvalitě vody.
Pozorovací a zkušební postupy:
— podrobnosti o přiřazení pokusných zvířat z jednotlivých skupin do podskupin s perfuzí,
— podrobnosti o systémech posuzování, včetně kritérií a posuzovacích stupnic pro jednotlivá měření v rámci podrobných klinických pozorování,
— podrobnosti o funkčních testech pro měření reakce různých smyslových orgánů na smyslové podněty (např. sluchové, zrakové a dotykové), pro hodnocení síly úchopu, motorické aktivity (včetně podrobností o automatických zařízeních pro zjišťování aktivity) a další použité postupy,
— podrobnosti oftalmologických vyšetření, hematologických a biochemických vyšetření s příslušnými výchozími (normálními) hodnotami,
— podrobnosti o specifických neurobehaviorálních, neuropatologických, neurochemických nebo elektrofyziologických postupech.
Výsledky:
— tělesná hmotnost a její změny, včetně tělesné hmotnosti v době utracení,
— spotřeba krmiva a případně vody,
— údaje o toxických reakcích podle pohlaví a úrovně dávek, včetně popisu příznaků toxicity nebo mortality,
— povaha, závažnost a trvání (doba nástupu a následný průběh) podrobných klinických nálezů (zda jsou vratné nebo nevratné),
— podrobný popis všech výsledků funkčních testů,
— pitevní nálezy,
— podrobný popis všech neurobehaviorálních, neuropatologických a neurochemických nebo elektrofyziologických výsledků, jsou-li k dispozici,
— údaje o absorpci a metabolismu, jsou-li k dispozici,
— statistické vyhodnocení výsledků, kde je to možné.
Diskuse a interpretace výsledků.
— informace o závislosti účinku na dávce,
— význam jakýchkoliv dalších toxických účinků pro závěry týkající se neurotoxického potenciálu zkoušené chemické látky,
— dávková úroveň bez pozorovatelných nepříznivých účinků (NOAEL),
— je žádoucí uvést konkrétní vyjádření o celkové neurotoxicitě zkoušené chemické látky.