bod 2 · 331/2004 Sb.

3.2. Reakční směs PCR

Reagencie	Množství v reakci	Konečná koncentrace
Sterilní UPW	12,625 µl
10x pufr PCR (1) (15 mM MgCl₂)	2,5 µl	1x (1,5 mM MgCl₂)
BSA (frakce V) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs dNTP (20mM)	0,125 µl	0,1 mM
Primer RS-1-F (10 µM)	2,0 µl	0,8 µM
Primer RS-1-R (10 µM)	2,0 µl	0,8 µM
Primer NS-S-F (10 µM)⁽²⁾	0,15 µl	0,06 µM
Primer NS-6-R (10 µM)⁽²⁾	0,15 µl	0,06 µM
Taq polymeráza (5U/µl)⁽¹⁾	0,2 µl	1,0 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové množství	25,0 µl
⁽¹⁾ Metoda byla validována použitím Taq polymerázy Perkin Elmer (AmpliTaq) a Gibco BRL. ⁽²⁾ Koncentrace primerů NS-5-F a NS-6-R byly optimalizovány pro výkrojky pletiva pupkových částí hlíz bramboru pomocí homogenizační metody a purifikace DNA podle Pastrika (2000) (viz 6.1.6.1.a)). Použití extrakční metody třepáním nebo jiných metod izolace DNA může vyžadovat nové provedení optimalizace koncentrací reagencií.