bod 2 · 331/2004 Sb. · Usucapio

4.2. Reakční směs PCR

a) Protokol PCR specifický pro biovar ¹/₂

Reagencie	Množství v reakci	Konečná koncentrace
Sterilní UPW	12,925 µl
10x pufr PCR⁽¹⁾	2,5 µl	1x (1,5 mM MgCl₂)
BSA (frakce V) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs dNTP (20mM)	0,125 µl	0,1 mM
Primer Rs-1-F (10 µM)	2,0 µl	0,8 µM
Primer Rs-1-R (10 µM)	2,0 µl	0,8 µM
Taq polymeráza (5U/µl)⁽¹⁾	0,2 µl	1,0 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové množství	25,0 µl
(1) Metoda byla validována použitím Taq polymerázy Perkin Elmer (AmpliTaq) a Gibco BRL.

b) Protokol PCR specifický pro Biovar 3/4/5

Reagencie	Množství v reakci	Konečná koncentrace
Sterilní UPW	14,925 µl
10x pufr PCR (1)	2,5 µl	1x (1,5 mM MgCl₂)
BSA (frakce V) (10 %)	0,25 µl	0,1 %
Směs dNTP (20mM)	0,125 µl	0,1 mM
Primer Rs-1-F (10 µM)	1,0 µl	0,4 µM
Primer Rs-3-R (10 µM)	1,0 µl	0,4 µM
Taq polymeráza (5U/µl) (1)	0,2 µl	1,0 U
Množství vzorku	5,0 µl
Celkové množství	25,0 µl
(1)Metoda byla validována použitím Taq polymerázy Perkin Elmer (AmpliTaq) a Gibco BRL.