6. Mikrobiologické vyšetření se provádí kontrolou jedním výběrem (dále jen „výběrová kontrola“), kdy se o posouzení šarže, popřípadě její části jako vyhovující nebo nevyhovující mikrobiologickým požadavkům, stanoveným v části 1 a 2 přílohy rozhodne podle výsledku vyšetření jednoho výběru v rozsahu n.
6.1. Při výběrové kontrole se vyberou vzorky z šarže, a to v počtu n náhodným výběrem (§ 3 odst. 1).
6.2. Souhrn požadavků a pravidel, které platí pro odběr vzorků, jejich zkoušení a posouzení dávky se označuje jako plán vzorkování.
Výrobce (dovozce) při zjištění takto definovaného překročení tolerovaných hodnot vlastní kontrolou učiní opatření ke zjištění příčin překročení (výrobce na příklad s využitím systému kritických kontrolních bodů) a k zábraně opakování překročení.
Při překročení nejvyšších mezních hodnot rozhodne příslušný orgán státního dozoru o pozastavení a vyřazení potravin z oběhu. V případě, že se překročení týká nejvyšších mezních hodnot stanovených pro mikroorganismy působící onemocnění z potravin, vydá příslušný orgán státního dozoru příkaz k likvidaci nevyhovující šarže nebo její části.
6.2.1. Mikrobiologické požadavky stanovené v části 2 přílohy zahrnují:
a) výčet druhů nebo skupin mikroorganismů předepsaných k vyšetření (výčet znaků);
b) pro každý znak údaje o rozsahu výběru n a údaje o rozhodném čísle c, tj. plán vzorkování;
c) pro každý znak tolerované množství mikroorganismů m, M, přičemž M je povoleno v závislosti na c.
6.2.2. Definice symbolů:
| n | rozsah výběru, tj. počet vzorků určený k vyšetření, jehož účelem je rozhodnout, zda posuzovaná šarže výrobku (nebo její kontrolovaná část) bude posouzena jako vyhovující nebo nevyhovující stanoveným mikrobiologickým požadavkům; |
| m | množství mikroorganismů, které se připouští u všech vzorků výběru n; |
| M | množství mikroorganismů, které se ještě připouští u počtu vzorků, který je nižší nebo se rovná c; |
| c | rozhodné číslo, tj. počet vzorků z výběru n, u nichž se připouští hodnota M. |
Pokud se u všech vzorků z výběru n připouští pouze hodnota m, (M se nepřipouští), je hodnota c vyjádřena nulou a hodnota M proškrtnutím.
Hodnoty m, M jsou stanoveny se zohledněním vzájemné shody výsledků zkoušek. Konfidenční meze pro vzájemnou shodu výsledků zkoušek jsou uvedeny v příslušných českých technických normách.2)
6.2.3. Způsob vyjádření m, M:
a) Jako množství mikroorganismů
- v 1 g nebo v 1 ml vzorku; vyšetřuje se plotnovými metodami technikou počítání kolonií; jako mikroorganismy se počítají jednotky tvořící kolonie (cfu), např. 105 značí tolerované množství 1.105 mikroorganismů v 1 g nebo v 1 ml vzorku, 5.103 značí tolerované množství 5.103 mikroorganismů v 1 g nebo v 1 ml vzorku;
- v objemu vzorku určeném k vyšetření, jak je uveden za šikmou čarou po tolerovaném počtu mikroorganismů; vyšetřuje se u filtrabilních tekutin technikou membránové filtrace; např. 20/10 značí nejvýše 20 mikroorganismů v 10 ml vzorku;
b) Jako požadavek nepřítomnosti mikroorganismů
- v 1 ml či 0,2 ml tekutého neředěného vzorku nebo v 1 ml či 0,2 ml ředění 10-1 vzorku; vyšetřuje se plotnovými metodami, inokulum 1 ml se zalévá agarovou půdou, inokulum 0,2 ml se roztírá na povrch, očkují se a hodnotí vždy dvě paralelní plotny.
Vyjadřuje se jako nula s indexy a až d, přičemž:
0a značí, že mikroorganismy nesměji být prokazatelné při zalití 1 ml tekutého neředěného vzorku (0a značí méně než 1/ml vzorku)
0b značí, že mikroorganismy nesmějí být prokazatelné při zalití 1 ml ředění 10-1 vzorku (0b značí méně než 10 /ml vzorku nebo < 10/g vzorku)
0c značí, že mikroorganismy nesmějí být prokazatelné při roztěru 0,2 ml tekutého neředěného vzorku (0c značí méně než 5/ml vzorku)
0d značí, že mikroorganismy nesmějí být prokazatelné při roztěru 0,2 ml ředění 10-1 vzorku. (0d značí méně než 50/ml vzorku nebo < 50/g vzorku)
- v objemu vzorku určeném k vyšetření, jak je uveden za šikmou čarou po čísle nula; vyšetřuje se u filtrabilních tekutin metodou membránové filtrace;
např. 0/10 značí požadavek nepřítomnosti mikroorganismů v 10 ml vzorku;
- v navážce nebo objemu vzorku určených k vyšetření, jak jsou uvedeny za šikmou čarou po čísle nula; vyšetřuje se naočkováním celé této navážky nebo celého objemu vzorku do příslušné tekuté půdy s následným pomnožením, vyočkováním na plotnové půdy a potvrzením podezřelých kolonií;
např. 0/25 značí požadavek nepřítomnosti mikroorganismů v 25 g nebo v 25 ml vzorku;
0/1 značí požadavek nepřítomnosti mikroorganismů v 1 g nebo v 1 ml vzorku.
6.2.4. Interpretace výsledků zkoušení při aplikaci plánů vzorkování:
Dávka nebo její část se posuzuje a výsledek zkoušení se interpretuje jako nevyhovující stanoveným mikrobiologickým požadavkům, pokud:
6.2.4.1. u jednoho nebo více vzorků z výběru n byla zjištěna hodnota vyšší než M pro jeden nebo více z předepsaných znaků (viz příklad č. 1);
6.2.4.2. u většího počtu vzorků, než je stanoveno hodnotou c, byly zjištěny hodnoty vyšší než m a nižší nebo rovné M, a to pro jeden nebo více z předepsaných znaků (viz příklad č. 2);
6.2.4.3. v případech, kdy je u všech vzorků z výběru n stanoven požadavek nepřítomnosti mikroorganismů, tedy když c = 0, m je vyjádřeno /podle 6.2.3 b)/ jako nula s příslušným indexem a až d nebo jako 0/10 či 0/25 či 0/1 a M je proškrtnuto, byly u jednoho nebo více vzorků sledované mikroorganismy prokázány (viz příklad č. 3).
Příklad č. 1:
Plán vzorkování (pro jeden znak)
| n | c | m | M |
| 5 | 1 | 102 | 103 |
| zjištěno: u jednoho vzorku ve sledovaném znaku 5.103/g | |||
| interpretace: překročení hodnoty M | |||
Příklad č. 2:
Plán vzorkování (pro jeden znak)
| n | c | m | M |
| 5 | 2 | 103 | 104 |
| zjištěno: hodnoty maximálně m pouze u dvou vzorků, | |||
| u tří vzorků hodnoty 5.103/ml, 7.103/ml, 1.104/ml | |||
| interpretace: překročení hodnoty c | |||
Příklad č. 3:
Plán vzorkování (pro jeden znak)
| n | c | m | M |
| 5 | 0 | 0/25 | - |
| zjištěno: u jednoho vzorku prokázána přítomnost sledovaných mikroorganismů z navážky 25 g. | |||
| interpretace: průkaz určitých mikroorganismů v navážce (objemu) vzorku určené k vyšetření při požadavku nepřítomnosti těchto mikroorganismů | |||
6.2.5. Pokud byla šarže nebo její část posouzena jako nevyhovující pro překročení tolerovaných hodnot maximálně však do nejvyšších mezních hodnot, rozhodne příslušný orgán státního dozoru o dalším nakládání s potravinou s přihlédnutím zejména k druhu potraviny, míře překročení tolerovaných hodnot, druhu mikroorganismů a k dalším významným okolnostem (např. o urychleném doprodeji zboží, provedení hygienicko-sanitačních opatření ve výrobě nebo oběhu potravin, zákazu použití potraviny pro původně určený okruh spotřebitelů).
6.2.6. Účinnost plánu vzorkování:
Tabulka č. 3
Pravděpodobnost posouzení kontrolované dávky jako vyhovující* v závislosti na skutečném zastoupení nevyhovujících jednotek v této dávce pro plány vzorkování
c = 0; n = 5
c = 0; n = 10
| skutečné % nevyhovujících jednotek v dávce (p) | počet vyšetřených jednotek, tj. počet vzorků výběr v rozsahu n | |
|---|---|---|
| 5 | 10 | |
| 1,0 | 0,95 | 0,90 |
| 2,0 | 0,90 | 0,82 |
| 3,0 | 0,86 | 0,74 |
| 4,0 | 0,82 | 0,67 |
| 5,0 | 0,77 | 0,60 |
| 10,0 | 0,59 | 0,35 |
| 20,0 | 0,33 | 0,11 |
| 30,0 | 0,17 | 0,03 |
| 40,0 | 0,08 | 0,01 |
| 50,0 | 0,03 | < |
| 60,0 | 0,01 | < |
| 70,0 | < | < |
* pro pravděpodobnost posouzení kontrolované dávky jako vyhovující se užívá symbol Pa
Pa 0,95 (první řádek tabulky č. 3): v 95 případech ze 100 bude šarže obsahující ve skutečnosti 1 % nevyhovujících jednotek (ekvivalentních odebíranému vzorku) posouzena jako vyhovující, pokud je rozsah výběru n roven 5; se stoupajícím n hodnota Pa klesá
<: Pa menší než 0,005
Tabulka č. 4
Pravděpodobnost posouzení kontrolované dávky jako vyhovující* v závislosti na skutečném zastoupení nevyhovujících a ještě vyhovujících jednotek v této dávce pro plán vzorkování: c = 1; n = 5
| pd | pm | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 0 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 | 80 | 90 | |
| 0 | 1,00 | 0,92 | 0,74 | 0,53 | 0,34 | 0,19 | 0,09 | 0,03 | 0,01 | < |
| 1 | 0,95 | 0,87 | 0,70 | 0,50 | 0,31 | 0,17 | 0,08 | 0,03 | 0,01 | |
| 2 | 0,90 | 0,83 | 0,66 | 0,47 | 0,29 | 0,16 | 0,07 | 0,02 | < | |
| 3 | 0,86 | 0,79 | 0,62 | 0,44 | 0,27 | 0,15 | 0,06 | 0,02 | ||
| 4 | 0,82 | 0,74 | 0,59 | 0,41 | 0,25 | 0,13 | 0,06 | 0,02 | ||
| 5 | 0,77 | 0,70 | 0,55 | 0,38 | 0,23 | 0,12 | 0,05 | 0,01 | ||
| 10 | 0,59 | 0,53 | 0,41 | 0,27 | 0,16 | 0,07 | 0,03 | 0,01 | ||
| 20 | 0,33 | 0,29 | 0,21 | 0,13 | 0,06 | 0,02 | 0,01 | < | ||
| 30 | 0,17 | 0,14 | 0,09 | 0,05 | 0,02 | < | < | |||
| 40 | 0,08 | 0,06 | 0,04 | 0,01 | < | |||||
| 50 | 0,03 | 0,02 | 0,01 | < | ||||||
| 60 | 0,01 | 0,01 | < | |||||||
| 70 | < | < | ||||||||
* pro pravděpodobnost posouzení kontrolované dávky jako vyhovující se užívá symbol Pa
pd: zastoupení nevyhovujících jednotek v %
pm: zastoupení ještě vyhovujících jednotek v %
<: Pa menší než 0,005
Tabulka č. 5
Pravděpodobnost posouzení kontrolované dávky jako vyhovující* v závislosti na skutečném zastoupení nevyhovujících a ještě vyhovujících jednotek v této dávce pro plán vzorkování: c = 2; n = 5
| pd | pm | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 0 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 | 80 | 90 | |
| 0 | 1,00 | 0,99 | 0,94 | 0,84 | 0,68 | 0,50 | 0,32 | 0,16 | 0,06 | 0,01 |
| 1 | 0,95 | 0,94 | 0,89 | 0,79 | 0,64 | 0,47 | 0,29 | 0,15 | 0,05 | 0,01 |
| 2 | 0,90 | 0,90 | 0,85 | 0,75 | 0,60 | 0,43 | 0,27 | 0,13 | 0,04 | < |
| 3 | 0,86 | 0,85 | 0,81 | 0,71 | 0,57 | 0,40 | 0,24 | 0,12 | 0,04 | |
| 4 | 0,82 | 0,81 | 0,76 | 0,67 | 0,53 | 0,38 | 0,22 | 0,10 | 0,03 | |
| 5 | 0,77 | 0,70 | 0,72 | 0,63 | 0,50 | 0,35 | 0,20 | 0,09 | 0,02 | |
| 10 | 0,59 | 0,58 | 0,55 | 0,47 | 0,36 | 0,23 | 0,12 | 0,05 | 0,01 | |
| 20 | 0,33 | 0,32 | 0,29 | 0,24 | 0,16 | 0,09 | 0,03 | 0,01 | < | |
| 30 | 0,17 | 0,16 | 0,14 | 0,11 | 0,06 | 0,02 | < | < | ||
| 40 | 0,08 | 0,08 | 0,06 | 0,04 | 0,02 | < | ||||
| 50 | 0,03 | 0,03 | 0,02 | 0,01 | < | |||||
| 60 | 0,01 | 0,01 | 0,01 | < | ||||||
| 70 | < | < | < | |||||||
* pro pravděpodobnost posouzení kontrolované dávky jako vyhovující se užívá symbol Pa
pd: zastoupení nevyhovujících jednotek v %
pm: zastoupení ještě vyhovujících jednotek v %
<: Pa menší než 0,005
Tabulka č. 6
Pravděpodobnost posouzení kontrolované dávky jako vyhovující v závislosti na skutečném zastoupení nevyhovujících a ještě vyhovujících jednotek v této dávce pro plán vzorkování: c = 3; n = 5
| pd | pm | |||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 0 | 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 | 80 | 90 | |
| 0 | 1,00 | 1,00 | 0,99 | 0,97 | 0,91 | 0,81 | 0,66 | 0,47 | 0,26 | 0,08 |
| 1 | 0,95 | 0,95 | 0,94 | 0,92 | 0,86 | 0,77 | 0,62 | 0,44 | 0,23 | 0,07 |
| 2 | 0,90 | 0,90 | 0,90 | 0,87 | 0,81 | 0,72 | 0,58 | 0,40 | 0,21 | 0,05 |
| 3 | 0,86 | 0,86 | 0,85 | 0,83 | 0,78 | 0,68 | 0,54 | 0,37 | 0,18 | 0,04 |
| 4 | 0,82 | 0,82 | 0,81 | 0,79 | 0,73 | 0,64 | 0,50 | 0,34 | 0,16 | 0,03 |
| 5 | 0,77 | 0,77 | 0,77 | 0,75 | 0,69 | 0,60 | 0,47 | 0,31 | 0,14 | 0,02 |
| 10 | 0,59 | 0,59 | 0,58 | 0,56 | 0,52 | 0,43 | 0,32 | 0,18 | 0,06 | < |
| 20 | 0,33 | 0,33 | 0,32 | 0,30 | 0,27 | 0,20 | 0,12 | 0,04 | < | |
| 30 | 0,17 | 0,17 | 0,16 | 0,15 | 0,12 | 0,07 | 0,03 | < | ||
| 40 | 0,08 | 0,08 | 0,07 | 0,06 | 0,04 | 0,02 | < | |||
| 50 | 0,03 | 0,03 | 0,03 | 0,02 | 0,01 | < | ||||
| 60 | 0,01 | 0,01 | 0,01 | < | < | |||||
| 70 | < | < | < | |||||||
* pro pravděpodobnost posouzení kontrolované dávky jako vyhovující se užívá symbol Pa
pd: zastoupení nevyhovujících jednotek v %
pm: zastoupení ještě vyhovujících jednotek v %
<: Pa menší než 0,005
a) plán vzorkování je definován údajem o rozsahu výběru n a údajem o rozhodném čísle c a jeho účinnost je vyjádřena operativní charakteristikou. Každému plánu vzorkování přísluší jediná operativní charakteristika vyjadřující pro tento plán pravděpodobnost, s níž je kontrolovaná šarže nebo její část posouzena jako vyhovující mikrobiologickým požadavkům,
b) operativní charakteristiky užitých plánů vzorkování a statisticky vypočtené pravděpodobnosti jsou uvedeny v tabulkách č. 3 až 6.